165789. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 9-/gamma-amino-propil/-3-amino-karbazol előállítására és e vegyületet tartalmazó tesztcsíkok - glükóz enzimatikus kimutatására
3 165789 4 ingadozásoknál - mint ahogy ez a remissziós fotométer kiértékelésénél is fellép — a vér glükóz-meghatározására a tesztfilmek nem alkalmasak. Azt találtuk, hogy a 9-(7-amino-propil)-3-amino- 5 -karbazol az enzimatikus glükóz-kimutatásnak egy indikátora, melynek hatása más oxidációs indikátorokkal, különösen O-tolidinnel együtt tág határok közt független a hőmérséklettől és ezáltal a glükózkoncentráció szerint reprodukálható színérté- 10 ket mutat. A találmány szerinti indikátor azonkívül, hogy a hőmérsékletre nem érzékeny, még további értékes és meglepő tulajdonsággal is rendelkezik, mely a tesztcsíkok felhasználási körét jelentősen kiterjeszti. Bebizonyosodott ugyanis, hogy a 15 találmány szerinti indikátort a vizelet zavaró alkotórészei nem befolyásolják, így lehetségessé vált ezen tesztcsíkokkal a vizelet glükóztartalmának kvantitatív meghatározása. Az eddig ismert tesztcsíkok, melyek a glükóz-oxidáz/peroxidáz enzimatikus 20 glükózmeghatározás elvén alapulnak, indikátorként főleg o-tolidint tartalmaznak. Ezért a meghatározást bizonyos gyakran jelenlevő ismert vizeletalkotórészek, például az acetecetsav vagy aszkorbinsav, valamint a vizeletben jelenlevő több ismeretlen 25 anyag jelentősen zavarják. Ezáltal bár lehető volt a glükózkoncentráció kvalitatív, vagy legjobb esetben félkvantitatív meghatározása, megbízható kvantitatív kiértékelés mégsem volt lehetséges. A vizelet glükóztartalmának meghatározására alkalmazott, ezen találmány szerinti eljárással készített indikátorral preparált tesztpapír a legkülönbözőbb összetételű vizeletekben (pH, kísérőanyagok, fehérjetartalom stb.) azonos glükóz-tartalomnál mindig azonos színreakciót adott. Ez a felismerés nem volt előrelátható, éppen ezért a vizeletdiagnosztika szempontjából az eljárás gyakorlati értéke jelentős. A hőmérsékletre nem érzékeny tesztfilm előállítására, mint ahogy ezt az 1 598 153 számú Német Szövetségi Köztársaság-beli nyilvánosságra hozatali irat leírja, a reagenseket műanyagdiszperzióval, például poli-vinil-acetát-propionát-kopolimerrel (Propiofan 70 D) keverjük, melyhez sűrítőszerként vagy duzzasztószerként nátrium-alginátot (Algipon) adunk. További adalékanyagként alkalmasak az anionaktív nedvesítőszerek, mint a nátrium-nonilszulfát, vagy technikai minőségű, kevert szerves szulfonátok (Texapon P) és az ammónium-perfluoroktanoát. Pufferként" lényegében az 5—8, előnyösen az 5,5—7,0 pH-tartományú foszfátpuffer, illetve a citrátpufíer* vagy más szokásos puffer alkalmazható, mely a megadott pH-tartományt beállítja. A következő táblázat egy lehetséges recept példájíít mutatja, mellyel a glukóz-tesztfilmnél, egy hőmérsékletre nem érzékeny színreakció érhető el. I. Táblázat A megadott mennyiségek 100 g rétegkeverékre vonatkoznak Alkotórész Alsó határ Felső határ Előnyös mennyiség Műanyagdiszperzió 20 g 80 g 40 -50 g Duzzasztóanyag 0,1 g 2,0 g 0,5 - 0,6 g Nedvesítőszer 0,1 g 2,0 g 0,5 - 1,0 g Puffer 0,5 g 5,0 g 2,5 - 3,5 g Glükóz-oxidáz 102 egység 105 egység 103 -10 4 egység Peroxidáz 102 egység 10s egység 103 -I(f egység o-Tolidin 0,1 g 1,0 g 0,2 - 0,7 g Indikátor I+ 0,01 g 0,5 g 0,02- 0,03 g + = 9-(7-amino-propil)-3-amino-karbazol 55 A tesztfümet a következő módon készítjük: a műanyagdiszperzióhoz a többi alkotórészt vizes oldatban hozzáadjuk, kivéve az Indikátor I-t és az o-tolidint, melyet metanolban vagy acetonban 60 oldunk. A diszperziót jól összekeverjük és 100-500 JU, előnyösen 300-400 ju rétegvastagságban egy nem szívó alapra felvisszük, majd meleg levegővel szárítjuk. A felvitel például merev műanyagfóliára, csíkonként történhet. A csíkokat 65 ezután felvágjuk úgy, hogy derékszögű műanyaglapocskákat kapjunk, melyeknek alsó végén helyezkedik el a reaktív réteg. A reagens keveréket egy vízhatlan réteggel ellátott papír vagy vékony fólia felületére is felvihetjük. Az így rétegzett lapokat keskeny csíkokra vágjuk, melyeknek alsó szélét fóliaszalagokra feltűzzük vagy felragasztjuk, majd a fentieknek megfelelően, felvágjuk. Ez utóbbi módszer előnye a rövidebb rétegzési idő. 2
