165764. lajstromszámú szabadalom • Eljárás profilaktikus készítmény előállítására szarvasmarha trychophytosis megbetegedés ellen

7 165764 8 A házinyulaknak a készítménnyel való oltásánál egyben a készítmény aktivitását is vizsgáljuk. Az aktivitás minősítésénél kritériumként egy, az injekció helyén a 7. és 14. nap között feltűnő, elhatárolt gümő (6x6 mm) kialakulása, valamint a fészek hámlása és gyors behegedése szolgál. b) Alkalmazás: Egy hónapos borjakon végzett megfigyelések igazolták, hogy a borjaknál 20—30 napon belül nagyfokú aktív immunitás alakult ki. Fiatalabb (5—20 napos) borjak még nem érettek az immunizálásra, ezért náluk az immunitás aktivitása kisebb ;volt. A készítmény beadásával elért immunitás hatékonyságát és időtartamát 98 borjún vizsgáltuk meg, amelyet 1, 2, 3, 5, 8, 12, 14 hónappal, illetve 2, 3, 4 évvel az immunizálás után kóros anyaggal vagy a Trichophytosis kórokozó virulens törzseivel fertőztünk meg. Ellenőrzésül az azonosság elve szerint kiválasztott állatok szolgáltak, amelyek trichophytosison nem estek át és nem részesültek immunizálásban. Gazdaságokban az állatokat megfertőzött környezetben tartottuk, az immunizált állatok nem betegedtek meg trichophytosisban. A készítménnyel borjaknál elérhető immunitás hatékonyságának és aktivitásának tisztázására öt borjút a trichophytosis kórokozójának 20 frissen elkülönített, fertőzőképes közönséges törzsével fertőztünk meg~ Az epizootikus törzsek különféle, klimatikus feltételekben egymástól különböző zónákból származtak. Az immunizált állatok immunisok voltak a trichophytosis fertőzéssel szemben, míg valamennyi nem immunizált ellenőrzési borjú a trichophytosis tüneteit mutatta. Ezután 237 borjún kísérleteztünk a javasolt készítménnyel. A kísérleti állatokat 1-6 hónapos korukban oltottuk be a készítménnyel, míg a nem kezelt állatokat ugyanazokban a helyiségekben tartottuk. A kísérleti állatokat az immunizálás után 3 hónappal vizsgáltuk trichophytosis-fertőzés elleni immunitásra. Trichophytosisban megbetegedett állatokkal való természetes érintkezés mellett 107 borjú közül 16 betegedett meg, az ellenőrzési 130 borjú közül 125 (96%). Szigorú kísérleti feltételek mellett az immunizált borjak határozott ellenálló képességet mutattak a fertőzéssel szemben. Az állatok néhányánál (15—20%) kisebb, elszigetelt trichophytosis fészkeket állapítottak meg, amelyek egy hónap múlva gyógyszerek alkalmazása nélkül eltűntek. A készítmény megelőző hatását tovább vizsgálva a következő szakaszban egy megyében az összes újszülött borjút immunizáltuk, ahol évenként 2500-3000 állat (az összállatállomány 25-30%) betegedett meg. A 13 648 oltott borjú közül 4 éves megfigyelési idő alatt csupán 92 állatnál (0,67%) diagnosztizáltak trichophytosist. E megye gazdaságaiban ezzel a trichophytosist teljesen megszüntettük. Ezután a készítményt széleskörűen egy olyan közigazgatási területegységben alkalmaztuk, ahol évenként 4000 borjú született és a trichophytosisban megbetegedett állatok száma évenként 25—30 ezret ért el. A terület gazdaságainak kb. 5000 liter készítményt bocsájtottunk rendelkezésre, és elkezdődött az összes, 1 hónapnál idősebb 5 borjú teljes immunizálása. Mindegyik borjúnak intramuszkulárisan 2 x 5 ml készítményt adtak be, 10—14 napos időközzel. Egy félévvel később az összes gazdaságot, amely közül 660 trichophytosissel fertőzött volt, teljesen mentessé tették a 10 fertőzöstől, a tenyészállateladás korlátozása alól felmentették, a trichophytisosban betegedett állatok gyógykezelésére fizetett költségek megszűntek. 15 2. példa 3—4 ezer dózis előállítása A táptalaj beoltása tenyészettel, a készítmény 20 előállítása és az ampullatöltés elszigetelt helyiségben szigorú sterilitás mellett megy végbe. A TF 130 törzs tenyésztésére tápközegként 6,4-6,8 pH-jú maláta-agart használunk. 25 Az oltóanyag előállítására tálcákban maláta-agáron tenyésztett, 12—15 napos és 1,3—1,5 liter térfogatú gombatenyészetet, 200 ml fiziológiás oldattal leöblítünk, és a kapott szuszpenzióval új tálcákat oltunk be, amikor is tálcánként 5—7 ml 30 szuszpenziót használunk. A tálcákat 26—28 C°-on 14 napon át inkubáljuk. A tenyészet növekedése a 4, vagy 5. napon szemmel láthatóvá válik. 4—4 tálca biomasszáját fiziológiás oldattal steril 35 Petri-csészékbe öblítjük, majd ETA-MIRA csehszlovák gyártmányú homogenizáló készülékbe tesszük, 500 ml fiziológiás oldattal feltöltjük, és 30 percen át homogenizáljuk, amikor is a homogenizáló készüléket fordulószám-fokozaton-40 ként 10 percen át üzemeltetjük. A homogenizált szuszpenziót lombikba öntjük. Egy 15 literes palackba dupla géz-szűrőn keresztül 5 liter fiziológiás oldatot töltünk, majd utána a lombikból háromrétegű géz-szűrőn át hozzáöntjük a szusz-45 penziót. E művelet alatt a tenyészetszuszpenziót időnként fiziológiás oldattal hígítjuk. Bakteriális szennyeződés megelőzésére penicillin és streptomicin antibiotikumot adunk hozzá 1 ml készítményre számítva 100—100 NE mennyiségben. 50 A készítményt 6-10 millió sejt/ml koncentrációra hígítjuk. Ez az érték akkor áll fenn, ha az Állami Ellenőrző Intézet által kidolgozott és szabványosított Taraszewics féle baktérium-zava-55 rossági mérés 1-1,5 milliárd sejtet mutat ki 1 ml-ben. A két érték azonosságát a Gorjajev féle számlálókamrával 25 nagy négyzetben végzett számlálással állapítottuk meg. 60 A készítményt ampullákba töltjük és kupakkal elzárjuk. 4 tálcából 3—4 ezer egyszeri dózist (5 ml) lehet nyerni. A készítményt az 1. példa a) pontjában 65 foglaltak szerint vizsgáljuk. 4