165733. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a vér kalciumszintjét leszállító hatású polipeptidek előállítására
7 165733 8 vákuumban bepároljuk. A maradékot acetonitrilben eldörzsöljük, melegítjük, szűrjük és szárítjuk. A címben megnevezett vegyületet kapjuk. Olvadáspontja: 220° (bomlik), [aß 0 = -28°, dimetilformamidban. C4 szekvenciarész: Z—Thr-Asn-Thr—Gly— -Ala-Gly-Val-Pro-NH2 A C3 szekvenciarész előállításával analóg módon Z-Thr-Asn-Thr-Gly-NHNH2 -ből (Bj szekvenciarész) és H-Ala-Gly-Val-Pro-NH2 -bői (A 2 szekvenciarész) a címben megnevezett vegyületet kapjuk. , Olvadáspontja 206° (bomlik), MD = -25°, dimetilformamidban. C5 szekvenciarész: Z 3 -Arg—Thr-Asn—Thr—Gly— -Val-Gly-Ala-Pro-NH2 10 g Z-Thr-Asn-Thr-Gly-Val-Gly-Ala-—Pro—NH2 -t (C 3 szekvenciarész) 800 ml metanol és víz elegyben oldjunk, hozzáadunk 0,5 g palládiumszenet, és normál nyomáson hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, és vákuumban bepároljuk. A kapott olajat, a H-Thr-Asn-Thr-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 -t 100 ml dimetilformamidban oldjuk, hozzáadunk 10 g Z3 -Arg—OSU-t, és 16 óra hosszat 20°-on állni hagyjuk. Az oldatot ezután vákuumban besűrítjük, a terméket acetonnal leválasztjuk, és szűrjük. A maradékot acetonban finoman szuszpendáljuk, felforraljuk, szűrjük, és szárítjuk. A címben megnevezett vegyületet kapjuk. Olvadáspontja: 201° (bomlik), [aß0 =-15°, dimetilformamidban. C6 szekvenciarész: Z 3 —Arg-Thr—Asn—Thr-Gly-Ala-Gly-Val-Pro-NH2 A C5 szekvenciarész előállításával analóg módon Z-Thr-Asn-Thr-Gly-Ala-Gly-Val-Pro-NH2 -ből (C4 szekvénciarész) és Z 3 -Arg-OSU-ból a címben megnevezett vegyületet kapjuk. Olvadáspontja: 185° (bomlik), [a]p° = —14°, dimetilformamidban. D! szekvenciarész: Z—His-Lys(BOC)—Leu— -Gln-Thr-Phe-Pro-OH a) H-Thr-Phe-Pro-OH 176 g Z-Phe-Pro-OMe-t [előállítását közli a Z. physiol. Chem. 322, 288 (1969)] feloldunk 1000 ml metanol és n sósav elegyben, palládiumszén jelenlétében 20°-on és 1 atm nyomáson hidrogénezzük és bepároljuk. A maradékot 400 ml dimetilformamidban oldjuk, 0°-on hozzáadunk 100 ml trietilamint, a kikristályosodó trietilaminhidrokloridot kiszűrjük, és a szűrlethez Z-Thr-N3-t adunk [készül 87 g Z-Thr-NHNH 2 ből - előállítását közli az Ann. 670, 127 (1963) - 100 ml n sósavban való oldással és 35 ml n nátriumnitrit hozzáadásával]. Ezután 16 óra hosszat 0°-on állni hagyjuk, bepároljuk, a száraz maradékot etilacetátban oldjuk, egymás után híg sósavval, majd híg ammónia oldattal mossuk, szárítjuk, és bepároljuk. A maradékot heptánban porítjuk, petroléterrel mossuk és szárítjuk. Z—Thr—Phe—Pro-OMe-t kapunk. Olvadáspontja: 92° (bomlik), [a]" =-16°, dimetilformamidban. 5 53 g Z-Thr-Phe-Pro-OMe-t 530 ml metanolban oldunk, hozzáadunk 100 ml 2 n nátriumhidroxid oldatot, 1 óra hosszat 25°-on állni hagyjuk, hozzáadunk 50 ml 2 n sósavat, kb. 200 ml-re besűrítjük, 100 ml vizet adunk hozzá, a 10 pH értékét 10-re beállítjuk, a vizes oldatot 2 ízben etilacetáttal mossuk, a pH értékét 4 n sósavval l-re beállítjuk, a kivált Z-Thr-Phe—Pro—OH tripeptidet etilacetáttal extraháljuk, szárítjuk, és bepároljuk. Olvadáspontja: 105°, 15 [°!]D0= —28°, dimetilformamidban. A maradékot 500 ml dioxán és 100 ml víz elegyében oldjuk, és 20°-on és normál nyomáson palládiumkatalizátor jelenlétében hidrogénezzük. Szűrjük, bepároljuk, a száraz smaradékot éterrel mossuk és szárítjuk. H-Thr-Phe-Pro-OH-t kapunk. Olvadáspontja: 192° (bomlik), [aß0 =-41°, 95%-os ecetsavban. b)Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Phe-Pro-OH 25 40 g Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-NHNH2 -t [előállítását közli a Helv. Chim. Acta 52, 1789 (1969)] feloldunk 400 ml dimetilformamidban, —20°-ra lehűtjük, hozzáadunk 75 ml dioxán és 2n sósav elegyet, majd 6 ml terc-butilnitritet, 10 30 percig -20°-on keverjük, hozzáadunk 30 ml trietilamint és 20 g H-Thr-Phe-Pro-OH-t és 16 óra hosszat 25°-on reagáltatjuk. Ezután szárazrapároljuk, a maradékot éterrel, híg ecetsavval, éterrel, majd forró etilacetáttal mossuk. Ezután 35 nagyvákuumban szárítjuk, és Z—His-Lys(BOC)— -Leu-Gln-Thr-Phe-Pro-OH-t kapunk. Olvadáspontja: 200° (bomlik), [aß 0 =-47°, dimetilformamidban. 40 D2 szekvenciarész: Z-His—Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Phe-Pro-NHNH2 a) Z-Gln-Thr-Phe-Pro-OMe 45 84,8 g Z-Thr(t-But)-OMe-t [előállítását közli az Ann. 670, 127 (1963)] feloldunk 1500 ml metanolban és hozzáadunk 125 ml 2 n sósavat és 10 g 10%-os palládiumszenet. Négy óra hosszat való hidrogénezés után a katalizátort kiszűrjük, és 50 teljesen bepároljuk. 61,2 g Z-Gln-OH-t [előállítását közli az Ann. 640, 145 (1961)] és 25,6 g N-hidroxi-szukcinimidet 1000 ml acetonitril és dimetilformamid elegyben oldunk és —15°-ra lehűtjük. Először hozzáadjuk 45,7 g diciklohexil-55 karbodiimid 200 ml acetonitrillel készült oldatát, majd a fent kapott H-Thr(t-But)-OMe • HCl dimetilformamiddal készült oldatát 30,4 ml trietilamin hozzáadásával. Körülbelül 16 óra hosszat időnként megrázva szobahőmérsékleten állni hagy-60 juk. A kikristályosodó trietilaminhidrokloridot, illetve diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, és a szüredéket teljesen bepároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk, és n sósavval és 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk. Nátrium-65 szulfáton való szárítás után a szerves fázist kb. 4
