165733. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a vér kalciumszintjét leszállító hatású polipeptidek előállítására
9 165733 10 200 ml térfogatúra bepároljuk. Petrolétert adunk hozzá, mire olaj válik ki. A kivált olajat eldörzsöléssel porrá alakítjuk át, és leszűrjük. Z-Gln-Thr(t-But)-OMe-t kapunk. Olvadáspontja: 106°, [a]fe0= + ll°, dimetUformamidban. 5 78,0 g Z-Gln-Thr(t-But)- OMe-t 800 ml metanolban oldunk, és 65 ml hidrazinhidrátot adunk az oldathoz. Szobahőmérsékleten 48 óra hosszat állni hagyjuk, majd teljesen bepároljuk. A maradékot vízzel kezeljük, majd metanol és víz io elegyéből átkristályosítjuk. Z-Gln-Thr(t-But)-NHNH2 -t kapunk. Olvadáspontja: 202°, [a]2 D ° = = -13°, metanolban. 45,3 g Z-Phe-Pro-OMe-t 750 ml metanolban oldunk, és hozzáadunk 55 ml 2 n sósavat és 12 g 15 10%-os palládiumszenet. Két óra hosszat való hidrogénezés után a számított hidrogénmennyiség majdnem teljesen elhasználódik. A katalizátort kiszűrjük, és a szűrletet bepároljuk. 49,5 g Z-Gln-Thr(t-But)-NHNH2 -t 500 ml 2 n dimetilformamidban oldunk, és -20°-ra lehűtjük, 77 ml éteres 5n sósav és 13,4 ml terc-butilnitrit hozzáadása után 10 percig keverjük, és 54 mltrietilaminnal semlegesítjük. A fent kapott H-Phe-Pro-OMe • HCl-t 150 ml dimetilformamid- 2 5 ban oldjuk, 15,4 ml trietilamint adunk hozzá, és a dipeptidazidhoz öntjük. Szobahőmérsékleten 4 óra hosszat való keverés után a kikristályosodott trietilaminhidrokloridot kiszűrjük, és a szűrletet teljesen bepároljuk. A maradékot kloroform és 30 metanol eleggyel kovasavgélen szűrjük. Etilacetát és petroléter elegyéből kristályosítva Z—Gin— -Thr(t-But)-Phe-Pro-OMe-t kapunk. Olvadáspontja: 110°, [a]h° =-41°, metanolban. A tetrapeptidet 250 ml trifiuorecetsavban old- 35 juk. Húsz percig szobahőmérsékleten való állás után az oldatot térfogatának felére bepároljuk, és a terméket éterrel leválasztjuk. Szűréssel és éterrel való alapos mosással szárítás után Z-Gln-Thr-Phe-Pro-OMe-t kapunk. Olvadáspontja: 154°, 40 [ot]h° -59°, metanolban. b) Z-His-Lys(BOC)-Leu-NHNH2 114g Z-Lys(BOC)-OH-t előállítását közli a 45 J. Org. Chem. 33, 1261 (1968)], 48 g H-Leu-OMe-t [előállítását közli a Helv. Chim. Acta 36, 1109 (1968)] és 69 g N-hidroxi-szukcinimidet 600 ml etilacetátban oldunk, és -20°-ra lehűtjük. Hozzáadjuk 65 g diciklohexilkarbodiimidnek 50 300 ml etilacetáttal készült oldatát. Időnként megrázva 16 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A kikristályosodott diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, és a szűrletet teljesen bepároljuk. A szilárd maradékot vízben oldjuk. Etilacetát és 55 petroléter elegyéből átkristályosítva Z-Lys(BOC)-Leu-OMe-t kapunk. Olvadáspontja: 113°, [a]D°=-18°, metanolban. 101,5 g Z-Lys(BOC)-Leu-OMe-t feloldunk 1000 ml etilacetátban, és hozzáadjuk 40 ml 5 n 60 éteres sósav 300 ml etilacetáttal készült előre hűtött oldatát. 50 ml dimetilformamidban szuszpendált 5g 10%-os palládiumszén hozzáadása után 3,5 óra hosszat hidrogénezzük. A számított hidrogénmennyiség eközben majdnem teljesen el- 65 használódik. Ezután a katalizátort kiszűrjük, és a szüredéket bepároljuk. 78,7 g Z-His-NHNH2 -t [előállítását közli a J. Am. Chem. Soc. 76, 1326 (1954)]. 400 ml dimetilformamidban oldunk, 182 ml 5 n éteres sósavat adunk hozzá, és —10°-ra lehűtjük. 32,5 ml terc-butilnitrit hozzáadása után 10 percig tovább keverjük, és 140 ml trietilaminnal semlegesítjük. A fent kapott H-Lys(BOC)-Leu-OMe • HCl-t feloldjuk 300 ml dimetilformamidban, 36,4 ml trietilamint adunk hozzá, és az azidoldathoz öntjük. Szobahőmérsékleten 4 óra hosszat való keverés után a kikristályosodott trietilaminhidrokloridot kiszűrjük, és a szűrletet teljesen bepároljuk. Olajat kapunk, amelyet etilacetátban oldunk. Vízzel való mosás után a szerves fázist nátriumszulfáton szárítjuk, szűrjük, és bepároljuk. Ezután petroléterrel leválasztjuk, és szűrjük. A nyersterméket kovasavgélen való kromatografálással és kloroform és metanol eleggyel való eluálással tisztítjuk. Éter és petroléter elegyből kristályosítva Z-His-Lys(BOC)-Leu-OMe-t kapunk. Olvadáspontja: 146°, [a]&° =-28°, metanolban. 64.5 g Z-His-Lys(BOC)~Leu-OMe-t feloldunk 300 ml metanolban és hozzáadunk 15 ml hidrazinhidrátot. Szobahőmérsékleten 3 napi állás után az oldatot bepároljuk. A száraz maradékhoz etilacetát és n-butanol elegyét adjuk, és telített nátriumklorid oldattal több ízben mossuk. A szerves fázist bepároljuk, és a száraz maradékot kovasavgél oszlopon kloroform és metanol elegyével szűrjük. Z-His-Lys(BOC)-Leu-NHNH2 -t kapunk. Olvadáspontja: 181°, [a]o° = — 26°, metanolban. c)Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Phe-Pro-NHNH2 38,4 g Z-Gln-Thr-Phe-Pro-OMe-t feloldunk 1500 ml metanol- és dimetilformamid elegyben. 10 g 10%-os palládiumszenet 50 ml vízben szuszpendálunk, és hozzáadjuk az oldathoz. Körülbelül fél óra múlva a számított hidrogénmennyiség gyakorlatilag elhasználódik. A katalizátort kiszűrjük, és a szűrletet bepároljuk. 38.6 g Z-His-Lys(BOC)-Leu-NHNH2 -t feloldunk 250 ml dimetilformamidban. Lehűtjük —15°-ra és hozzáadunk 42 ml 5 n éteres sósavat, és 7,3 ml terc-butilnitritet. Tíz percig keverjük, és 29,5 ml trietilaminnal semlegesítjük. A fent kapott H-Gln-Thr-Phe-Pro-OMe-t feloldjuk 250 ml dimetilformamidban és hozzáöntjük a peptidazid oldathoz. Szobahőmérsékleten való 4 órás keverés után a kivált trietilamin-hidrokloridot kiszűrjük, és a szürletet teljesen bepároljuk. A maradékot etilacetát és n-butanol elegyében oldjuk, és n ammónia oldattal, n kénsav oldattal és több vízzel mossuk. A szerves fázist teljesen bepároljuk, és a maradékot kovasavgél oszlopon kloroform, metanol és víz elegyével mossuk. Z - Hi s -Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Phe-Pro-OMe-t kapunk. Olvadáspontja: 171° [a]D°'=-54°, metanolban. 43,6 g Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Phe-Pro-OMe-t feloldunk 1000 ml metanol és dimetil-5
