165733. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a vér kalciumszintjét leszállító hatású polipeptidek előállítására
5 165733 6 a) Z^Val-Pro^-NH 2 75 g H—pro—NH 2-t [előállítását közli a Chem. Ber. 96, 609 (1963)] feloldunk 850 ml dimetilformamidban, hozzáadunk 312 g Z—Val—OCP-t 5 [előállítását közli a Helv. Chim. Acta 46, 1609 (1963)], majd az oldatot 16 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Vákuumban való bepárlás után a maradékot etilacetátból átkristályosítjuk. Z-Val—Pro—NH2 -t kapunk. 01- 10 vadáspontja: 130-131°, [aß 0 =-41°, dimetilformamidban. b) Z-Gly-Val-Pro-NH2 15 190g Z-Val-Pro-NH2 -t feloldunk 2200 ml metanolban, hozzáadunk 85 ml 6 n metanolos sósavat, palládiumszén jelenlétében 20°-on és -normál nyomáson hidrogénezzük, majd a katalizátort kiszűrjük. A terméket éterrel le- 20 választjuk, mossuk, majd szárítjuk. A kapott H-Val-Pro-NH2 • HCl-ból (bomláspontja 217-218°, [<*]D0 = -57O , metanolban) 120g-ot 1800 ml dimetilformamidban szuszpendálunk, hozzáadunk 196 g Z-Gly-OCP-t [előállítását közli a 25 Chem. Pharm. Bull. Jap. 18, 784 (1970)], majd 67 ml trietilamint, és 17 óra hosszat 20°-on rázzuk. A kivált trietilamin-hidrokloridot szűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetát és víz eíegyében oldjuk. Nátrium- 30 szulfáton való szárítás és bepárlás után Z—Gly— -Val-Pro-NH2-t kapunk. Olvadáspontja: 82° (bomlik), [C*]D0 ] = -76° metanolban. c) Z-Ala-Gly-Val-Pro-NH2 35 92 g Z-Gly-Val-Pro-NH2 -t 2000 ml metanolban oldunk, hozzáadunk 27 ml ecetsavat, és 20°-on normál nyomáson palládiumszén jelenlétében hidrogénezzük. Szűrjük, vákuumban be- 40 pároljuk a száraz maradékot 1000 ml dimetilformamidban oldjuk, hozzáadunk 100 g Z—Ala— -OCP-t [előállítását közli a Helv. Chim. Acta 46, 1609 (1963)], rázzuk és az oldatot 17 óra hosszat 20°-on állni hagyjuk. Eztán vákuumban 4<; bepároljuk, és a • száraz maradékot etilacetát és éter elegyéből átkristályosítjuk. Z-Ala-Gly—Val-Pro-NH2 -t kapunk. Olvadáspontja 80° (bomlik), [a]D°=-31°, dimetilformamidban. 50 d) H-Ala-Gly-Val-Pro-NH2 27,5 g Z-Ala-Gly-Val-Pro-NH2 -t 550 ml metanolban szuszpendálunk, és 3 ml 96%-os kénsav hozzáadása után 4,1 ml jégecet és 3,1 g 10%-os palládiumszén jelenlétében hidrogénezzük. 55 Szűrés és az oldat bepárlása után kapott termék (szulfát) kovasavgélen meghatározott vékonyrétegkromatogramjának RfS értéke 0,4, kloroform és metanol 7 : 3 arányú elegyével + 0,5% vízzel. 60 B, szekvenciarész: Z-Thr-Asn-Thr-Gly-NHNH2 98 g Z-Thr-Asn-The-Gly-OEt-t [előállítását közli a Helv. Chim. Acta 52, 1789 (1969)] 1000 ml dimetilformamidban oldunk, és 100 ml 65 hidrazinhidrátot adunk hozzá. 16 óra hosszat szobahőmérsékleten való állás után szűrjük, és vízzel és éterrel mossuk. A címben megnevezett vegyületet kapjuk. Olvadáspontja: 221°, 1 [a]o° = -9°, dimetilformamidban. Ci szekvenciarész: H—Arg—Thr—Asn— -Thr-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 13,5 g BOC-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-NHNH2 -t [előállítását közli a Helv. Chim. Acta 52, 1789 (1969)] feloldunk 270 ml 8:2 arányú dimetilformamid és víz eíegyében, lehűtjük -15°-ra, hozzáadjuk 40 ml 4 n sósavnak dioxánnal készült oldatát, és 2,5 ml terc-butilnitritet. Tíz percig —15°-on keverjük, hozzáadunk 28 ml trietilamint, leszűrjük, majd hozzáadunk 10,5 g H—Vainly-Ala-Pro—NH2-t (A! szekvenciarész), 16 óra hosszat 0°-on keverjük, majd bepároljuk, a száraz maradékot éterrel mossuk, és szárítjuk. A maradékot metanolban oldjuk, egy tized térfogat vizet és hétszeres mennyiségű kloroformot adunk hozzá, és a kapott oldatot 500 g kovasavgéllel töltött oszlopon bocsátjuk keresztül. Növekvő mennyiségű metanollal eluálva bepárlás után BOC-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Val-Gly-Ala-Pro—NH2-t kapunk. Ezt 200 ml, 4n sósav dioxánnal készült oldatában szuszpendáljuk, és 2 óra hosszat 25°-on keverjük, majd bepároljuk, a száraz maradékot 0,2 n ecetsavban oldjuk, Amberlit—IRA—410 (acetát forma) műgyantával kezeljük, és a vizes oldatot liofilizáljuk. Ezután a maradékot éterrel, etilacetáttal, és ismét éterrel mossuk, és nátriumhidroxidon szárítjuk. A címben megnevezett vegyületet diacetát alakjában kapjuk. Olvadáspontja: 195° (bomlik), [aß 0 =-64°, dimetilformamid és 1 n sósav 1 :1 arányú elegyében. C2 szekvenciarész: H-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ala-Gly-Val-Pro-NH2 A Ci szekvenciarész előállításával analóg módon BOC-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-NHNH2 -ből és H-Ala-Gly-Val—Pro-NH2 -bői (A2 szekvenciarész) a címben megnevezett vegyületet kapjuk diacetát alakjában. Olvadáspontja: 155° (bomlik), [a]n0 = —38°, dimetilformamidban. C3 szekvenciarész: Z-Thr-Asn-Thr-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 11 g Z-Thr-Asn-Thr-Gly-NHNH2 -nek (Bj szekvenciarész) 350 ml dimetilformamiddal készült, —15°-ra lehűtött oldatához hozzáadjuk 47 ml, 1,85 n sósav dioxánnal készült oldatát és 2,2 ml térc-butilnitritet. Tíz percig —15°-on keverjük, —30°-ra lehűtjük, 12 ml trietilamint adunk hozzá, a hideg oldathoz H-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 -t (Ai szekvenciarész) szűrünk dimetilformamidban. 90 percig 0°-on keverjük, majd vákuumban bepároljuk, kloroformot adunk hozzá, és a kivált anyagot szűrjük és szárítjuk. A nyerstermék vízzel és metanollal készült oldatát Dowex 50-en szűrjük, Amberlit IRA 410-zel semlegesítjük, majd 3
