165733. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a vér kalciumszintjét leszállító hatású polipeptidek előállítására
3 165733 4 építése során a hosszúláncú peptidek szintézisében alkalmazott védőcsoportokkal megvédjük. Például a következőkben leírt C5 és C 6 szekvenciarészek felépítésénél az arginingyök guanidinocsoportjának blokkolására karbobenziloxicsoportot használunk, de más alkalmas védőcsoportokat, például nitrocsoportot, tozilcsoportot, p-nitrobenziloxikarbonil-csoportot vagy 2-(izopropiloxikarbonil)-3,4,5,6-tetraklórbenzoil-csoportot is alkalmazhatunk. A szintézis során a guanidocsoport protonizálásának védőhatását is kihasználhatjuk. A lizingyök e-aminocsoportjának blokkolására például a következőkben leírt Di és D2 szekvenciarészeknél karbo-terc-alkiloxicsoportot, előnyösen karbo-terc-butiloxi- csoportot használhatunk. Az új polipeptid felépítése során a j3-karboxilcsoport blokkolására például a következőkben leírt Fj szekvenciarésznél a terc-butiloxicsoport alkalmas, de más védőcsoportokat, például metiloxi-, etiloxi-, terc-amiloxi-, amid- vagy benziloxi-csoportot is használhatunk. Az új polipeptidek előállítási eljárása során egy védett aminocsoportnak szabad csoporttá való átalakítását, valamint egy funkcionálisan módosított karboxilcsoportnak szabad karboxilcsoporttá való átalakítását ismert módon hidrolizáló, illetve redukáló szerekkel való kezeléssel végezzük. Az új polipeptidek előállításának kiindulási vegyületeit, amennyiben még nem ismertek, a peptidkémiában ismert módszerekkel állíthatjuk elő az aminosavaknak egyesével vagy kisebb peptidegységek előzetes kialakítása után való összekapcsolásával. A találmány szerinti új polipeptidek sóik alakjában is előállíthatók, illetve felhasználhatók. Sókként szerves savakkal, például ecetsavval, tejsavval, borostyánkősavval, benzoesawal, szalicilsavval, metánszulfonsawal, toluolszulfonsawal, valamint polimer savakkal, mint a csersawal vagy karboximetilcellulózzal, és szervetlen savakkal, például hidrogénhalogenidekkel, amilyen a sósav, vagy kénsawal és foszforsawal alkotott sók jöhetnek számításba. Komplexek alatt például szervetlen vegyületeket, amelyek kalcium, magnézium, alumínium, kobalt és különösen cink fémekből vezethetők le, értünk. A találmány szerint előállított polipeptidek fontos gyógyászati elvet képviselnek. A kalciumplazma szintet csökkentik, és mint a parathormon antagonistái gátolják a csont leépülését. Az új vegyületek biológiai hatását patkányokon vizsgáltuk, és a vér kalciumszintjének csökkenése alapján 3000-6000 MRC-egység/mg peptid értékeket kaptunk. A beadható adag a kívánt hatástól, valamint a beadási formától függ. Általában kielégítő eredményeket érhetünk el 1-10 egység/kg testsúly napi egyszeri adaggal. Nagyobb emlősállatok napi adagja 70—700 egység, amelyet egyszerre vagy több részletben adhatunk be. Intramuszkuláris beadáshoz egy alkalmas beadási forma 70—700 egység hatóanyagot tartalmaz folyékony hordozóanyaggal összekeverve. A találmány szerint előállított vegyületek javasolhatók minden olyan állapotnál, amelynél a plazma kalciumszintjének csökkentése, illetve a csont anyagcseréjének befolyásolása kívánatos, 5 például a pajzsmirigy kiesése vagy a mellékpajzsmirigyek hiperfunkciója miatt az endogén tireokalcitonin hiánya következtében fellépő hiperkalcémiák kezelésére. Továbbá javasolhatók minden csontbetegségnél, amely növekvő leépíté-10 sén alapul vagy amelynél kívánatos a csontokban a kalcium megkötése, például osteoporosis, csonttörés, osteomalacia, rachitis és veséi eredetű osteodystrophia esetén, továbbá különösen kalciummal és/vagy foszfáttal végzett kombinációs 15 gyógykezelés során. A találmány szerint előállított vegyületeket gyógyszerként például gyógyszerkészítmények alakjában alkalmazhatjuk. Ez az említett vegyületeket parenterális beadásra alkalmas szerves vagy szer-20 vétlen hordozóanyaggal összekeverve tartalmazza. Depókészítmények formájában is felhasználhatók. A következő rövidítéseket használjuk: z = karbobenziloxi (benziloxikarbonil) Leu = L-leucil Bzl = benzil' Thr = L-treonil BOC = terc-butiloxikarbonil Val = L-valil Trt = tritil = trifenilmetil Arg = L-arginil OTB = terc-butiloxi Gin = L-glutaminil ONP = p-nitrofeniloxi His = L-hisztidil OCP = 2,4,5-triklórfeniloxi Pro = L-prolil OMe = metoxi Gly = glicil OEt = etoxi Lys = L-lizü N02 = nitro Phe = L-fenilalanil Ser = L-szeril Cys = L-ciszteinil Asn = L-aszparaginil Ala = L-alanil Asp = L-aszparagil osu = N-oxiszukcinimid t-But = terc-butil A következő példák szemléltetik a találmány szerinti eljárást anélkül, hogy azt ezekre korlátoznánk. A hőmérsékleti adatokat Celsius-fokban 45 adjuk meg. Az optikai forgatóképesség c értéke 1. A következő példákban az aminosav analízis kimutatta, hogy az egyes aminosavak a várt arányban fordulnak elő. 1. Kiindulási anyagok előállítása A! -szekvenciarész: H—Val—Gly—Ala—Pro—NH2 55 27,5 g Z-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 -t [előállítását közli a Helv. Chim. Acta 53, 2135 (1970)] 550 ml metanolban szuszpendálunk, és 3 ml 96%-os kénsav hozzáadása után 4,1 ml jégecet és 3,1 g 10%-os palládiumszén jelenlétében hidrogé-60 nézzük. Az oldatot szűrjük és bepároljuk. A termék (szulfát) vékonyrétegkromatogramja kovasavgélen 7 : 3 arányú kloroform-metanol eleggyel kifejlesztve Rfs = 0,2 értékű. 65 A2 -szekvenciarész: H-Ala-Gly-Val-Pro-NH 2 2
