165648. lajstromszámú szabadalom • Eljárás O-hidroxi-benzoesav alapú homo polimerek és enzimek komplexeinek előállítására

15 165648 16 komplexet (20 mg) ötször mossuk desztillált vízzel (5 ml, az egyes mosások időtartama 2 perc) és a végső felülúszó fázist elkülönítjük. A mintához 7-amiláz (5 mg) desztillált vízzel készült oldatát adjuk és a minta sűrűjét 16 órán át 4 C°-on keverjük. Az egyes felülúszó fázisokból aliquot mintát (25 jul) veszünk és az aliquot •részekben a Bernfeld és társai által ismertetett módszerrel meghatározzuk az enzimaktivitást úgy, hogy megmérjük az enzim által keményítőből kiválasztott glükóz mennyiségét. A szilárd halmazállapotú enzimet ezután tízszer 0,1 mólos acetát-pufferrel (pH 5,0, 5 ml, az egyes mosások időtartama 2 perc) mossuk. A legutolsó felülúszó fázis elkülönítése után a minta sűrűjét 0,005 mólos acetát-pufferrel (pH 5,0, 2 ml) szuszpendáljuk. A szuszpenzióból vett aliquot részekben (500/ul) meghatározzuk a fenti ismertetett módon az enzim aktivitását. Az enzimaktivitás meghatározása során kapott eredményeket a 11. példa után az I. táblázatban adjuk meg. A példában használt N-akriloil-4-amino-szalicilsav homopolimer titán(IV)-komplexét az alábbi módon állítjuk elő: N-akriloil-4-amino-szalicilsavat (15 g) desztillált vízben (180 ml) szuszpendálunk és a szuszpenzióhoz bóraxot (9,36 g) adunk. A szuszpenzió pH értékét 10 n nátrium-hidroxiddal 9-re állítjuk be és azo-bisz-izobutironitril (150 mg) etanollal (50 ml) készült oldatát adjuk hozzá, majd a kapott oldatot 80 C°-on tartjuk 48 órán át vízfürdő alkalmazásával. Ezután az oldatot desztillált vízzel (200 ml) felhígítjuk, majd 2n sósavval a fehérszínű polimert kicsapjuk. A kicsapott polimert tízszer mossuk desztillált vízzel (1 literes adagokban) dekantálás útján, majd etanollal ötször, forgó szárítón bepároljuk, végül 200 ml desztillált vízben szuszpendáljuk. Termelési hányad (száraz állapotra vonatkoztatva) 14,2 g. Az így kapott polimert (lg) 20 percen át 12,5 vegyes%-os titán(IV)-klorid-oldattal (10 ml) keverjük és így narancsszínű szilárd anyagot kapunk, melyet csökkentett nyomáson szűrünk és desztillált vízzel (100 ml) mosunk. A kapott mennyiség 980 mg (száraz állapotra vonatkoztatva). 7. példa A 6. példában ismertetett módon a megfelelő 4-aminosav helyett N-akriloil-5-amino-szalicilsawal előállítjuk a rózsaszínű homopolimert, illetve a vörösesbarna színű homopolimer-titán-komplexet. A 6. példában ismertetett módon előállítjuk továbbá a homopolimer-titán-komplex-szel a megfelelő 7-amiláz-komplexet. A kapott szilárd halmazállapotú enzim aktivitását az I. táblázatban adjuk meg. 8. példa A 6. példában ismertetett kísérleteket elvégezzük az alábbi módon előállított N-akriloil-4-5 amino-szalicilsav homopolimer-titán-komplexet használva. N-akriloil-4-amino-szalicilsavat (1 g) desztillált vízben (20 ml) szuszpendálunk és a szuszpenzió pH értékét 9,0-ra állítjuk be. E pH értéken a 10 monomer oldható. Az így kapott oldathoz azo-bisz-izobutiro-nitril (10 mg) etanollal (10 ml) készült oldatát adjuk, majd a kapott reakcióelegyet 48 órán át gőzfürdőn 80 C°-on tartjuk. A fehér polimert 2n sósavval csapjuk ki, majd 15 desztillált vízzel (250 ml) mossuk dekantálás útján. A polimert (1 g) 20 percen át 12,5 vegyes%-os titán(IV)-klorid-oldattal (10 ml) keverjük és a 20 kapott narancssárga anyagot leszűrjük, majd desztillált vízzel (100 ml) mossuk. A kapott anyag súlya 612 mg (száraz állapotban). A fenti módon előállított komplex-szel kapott 25 szilárd halmazállapotú enzim aktivitását az I. táblázatban adjuk meg. 9. példa 30 A 6. példában ismertetett kísérleteket megismételjük a 8. példában ismertetett módon előállított N-akriloil-5-amino-szalicilsav homopolimer-titán(IV)-komplexet használva. Természetesen 35 ez esetben a titán-komplex előállításához N-akriloil-5-amino-szalicilsavat használunk a megfelelő 4-aminosav helyett. Az így előállított szilárd halmazállapotú enzim aktivitását az 1. táblázatban adjuk meg. 40 10. példa A 6. példában ismertetett kísérleteket meg-45 ismételjük az alábbi módon előállított N-akriloil-4-amino-szalicilsav homopolimer-titán(IV)-komplexeket használva. N-akriloil-4-amino-szalicilsavat (1 g) szuszpen-50 dalunk desztillált vízben (20 ml) és a pH értékét 10 n snátriumhidroxiddal 4,5-re állítjuk be. A kapott oldathoz azo-bisz-izobutironitril (10 mg) etanollal (10 ml) készült oldatát adjuk és az így kapott reakcióelegyet 48 órán át vízfürdőn 55 80 C°-on tartjuk. Ezután a reakcióelegyet 20 ml desztillált vízzel felhígítjuk, majd 12,5 vegyes%-os titán(IV)-klorid-oldatot (10 ml) adunk a rekacióelegyhez és így csapjuk ki a narancssárga titán-komplexet. A komplexet leszűrjük és 200 ml 60 desztillált vizet szívatunk át rajta. A kapott anyag súlya 920 mg. A fenti módon előállított titán-komplex-szel kapott szilárd halmazállapotú enzim aktivitását az 65 I. táblázatban adjuk meg. 8