165648. lajstromszámú szabadalom • Eljárás O-hidroxi-benzoesav alapú homo polimerek és enzimek komplexeinek előállítására

165648 állapotú enzimként megfelelő speciális enzimpolimerrendszerként az alább felsoroltak bizonyultak például alkalmasnak: N-akriloil-4-amino-szalicilsav homopolimer-titán kelátkomplex j3-glükozidázzal alkotott komplexe, 5 N-akriloil-5-amino-szalicilsav homopolimer-titán kelátkomplex j3-glükozidázzal alkotott komplexe, N-akriloil-4-amino-szalicilsav homopolimer-borát kelátkomplex dehidrogenáz-laktáttal alkotott komplexe, 10 N-akriloil-4-amino-szalicilsav-homopolimer dehidrogenáz-laktát komplexe, N-akriloil-4-amino-szalicilsav homopolimer 0-glükozidáz komplexe, N-akriloil-5-amino-szalicilsav homopolimer j3-glü- 15 kozidáz komplexe, N-akriloil-5-amino-szalicilsav homopolimer-borát kelátkomplex dehidrogenáz-laktáttal alkotott komplexe, N-akriloil-5-amino-szalicilsav homopolimer de- 20 hidrogenáz-laktát komplexe, N-akriloil-4-amino-szalicilsav homopolimer-titán kelátkomplex a-amilázzal alkotott komplexe, N-akriloil-5-amino-szalicilsav homopolimer-titán kelátkomplex a-amilázzal alkotott komplexe, 25 N-akriloil-4-amino-szalicilsav homopolimer-titán kelátkomplex glükamilázzal alkotott komplexe, N-akriloil-5-amino-szalicilsav homopolimer-titán kelátkomplex glükamilázzal alkotott komplexe. A polimer-enzim komplexek előállíthatók az 30 enzim és a homopolimer vizes szuszpenziójának egyszerű összekeverése és ezt követően a szilárd anyagok elkülönítése útján. Az elkülönítés történhet például centrifugálással a felülúszó anyalúgból. 35 A találmány szerinti szilárd halmazállapotú enzimek felhasználhatók enzimakciókon alapuló ipari eljárásoknál a vízoldható és gyakran nem megfelelően stabil enzimek helyett. Alternatív módon felhasználhatók enzimek tisztítására, azaz 40 segítségükkel az enzimek oldatából az enzimek elkülöníthetők. Egyéb felhasználási területek a szakember számára ismeretesek. A polimer-enzim komplexeket felhasználásuk esetén például szilárd halmazállapotú inert hor- 45 dozóanyagot, így például üveggyöngyöt tartalmazó oszlopba töltjük és a nyersanyagot vizes oldata formájában az oszlopra felvisszük. Míg az oszlopon a kiindulási anyagot tartalmazó oldat áthalad, az enzimek a kívánt enzimreakciót 50 elvégzik. Más iparilag hasznosítható enzimek, melyek a találmány szerinti komplexeket alkotó homopolimerekhez kapcsolódhatnak, az alábbiak: 55 glükóz-izomeráz, celluláz, kataláz, glükózoxidáz, invertáz, 60 laktáz, proteáz és pektináz. A találmányt az alábbi példákkal közelebbről megvilágítjuk. 65 Megjegyezzük, hogy a példákban végzett reakciólépéseket szobahőmérsékleten végezzük. A komplexek kitermelési adataira vonatkozólag megemlítjük, hogy a homopolimer és az enzim közötti kötés különleges jellege következtében a homopolimer egységnyi súlyához kapcsolódó enzim mennyisége a homopolimer és az enzim keverési arányától függ. A példákban említett műveletekben meghatározott súlyú enzimet adunk meghatározott súlyú homopolimer vizes szuszpenziójához, majd a kapott elegyet alaposan megkeverjük. Megállapítható, hogy az enzim a homopolimer felületén egyenletesen oszlik el. így a homopolimer súlyára vonatkoztatva a komplex „hozam" 100%-os. A példákban, továbbá az enzimaktivitási vizsgálatokban jelezzük, hogy a homopolimer milyen mennyiségben köti meg az enzimet. A komplexek azonosításához szükséges fizikai állandókkal kapcsolatban megjegyezzük, hogy nem állnak rendelkezésünkre ilyen adatok. A komplexek nem kémiai úton előállított termékek olyan értelemben, hogy nincs meghatározott vagy meghatározható képletük. Mint korábban említettük, a homopolimerhez kötött enzim mennyisége a homopolimer és az enzim viszonylagos mennyiségétől függ mindaddig, míg a homopolimer enzimmel nem „telített". Ez vonatkozik bármely, hordozóra felvitt vagy más módon oldhatatlanná tett enzimre, és így a szakirodalomban ezekre a termékekre nem szokásos fizikai állandókat megadni. A találmány szerinti eljárással előállított komplexek vonatkozásában jellemző, és így igen fontos adat az enzim aránya terméken belül és a termék enzimaktivitása. Ezek az adatok a példákban említett aktivitási vizsgálatokkal állapíthatók meg. Megjegyezzük továbbá, hogy hagyományos fizikai állandók, így például az olvadáspont vagy az elemzési adatok meghatározása nem végezhető el anélkül a jelentős veszély nélkül, hogy az enzim lebomlik, hiszen az enzimek általában körülbelül 100 C° körül bomlanak, míg a találmány szerinti eljárásban ismertetett polimerek olvadáspontja 225 C° körül van. A példákban az alábbi rövidítéseket használjuk: poli-4-sav = poli-5-sav = O.S.= 1. példa N-akriloil-4-amino-szalicilsav homopolimer, N-akriloil-5-amino-szalicilsav homopolimer, optikai sűrűség meghatározott hullámhosszon. Szabad poli-4-sav és borát-komplexbe vitt poli-4-sav reakciója dehidrogenáz-laktáttal 500 mg szabad, illetve 500 mg borát-komplexbe vitt poli-4-sav 1—1 ml vízzel készült szuszpenziójához 10-10/J dehidrogenáz-laktátot (szállító cége: Koch-Light Laboratories, Colnbrook, Buckinghamshire, Nagy-Britannia, aktivitása 150 egység/mg) adunk. A keveréket azonnal 3