165547. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (gamma ) 7-SZIN-benziloximetil-norborn-2-ÉN-5-ON optikai antipódjainak előállítására

3 165547 4 -benziloximetil-norborn^2-én-5-on redukció j a következik be lassabban. Megállapítottuk továbbá, hogy más mikroorganizmusok, így a Saccharomyees drosophylarum, Saccharomyees carlsbergensis, Saccharomyees kluyverii, Saccharomyees rouxii és Pichia carsonii optikailag aktív, endo- és exo-térállású hidroxü-csoportat tartalmazó alkoholokat egyaránt előállítanak a (±) 7-szin-benziloximetil-norborn-2-én-5-onból. Ez utóbbi felismerés képezi a találmány alapját. Az exo- és endo-7--szin-benziloximetil-norborn^2-én-5-olok ugyanis kromatográfiásan elválaszthatók egymástól. Így amennyiben a ( + ) 7-szin-benziloximetil-norborn-2-én-5-on mikrobiológiai redukciójakor az egyik optikai antipódból exo-7-szin-benziloxi-norborn-2-én-5-ol, a másik optikai antipádból endo-7-szin-benziloximetil-norborn-2-én-5-ol képződik, akkor a kapott optikailag tiszta exo- és endo-alkoholokat kromatográfiás elválasztás után kémiai úton a 7-sziin-ibenziloximetil-norborn-2-én-5-on optikai antipódjaivá lehet oxidálni. Vizsgálataink szerint a Saccharomyees drosophylarum <(MNG 92) törzs a (±) 7-szin-benzíloxi;metil-norborn-2^én-5-onból (+) exo-7-szin-benziloximetil-norbom-2-én-5-ort és (—) endo-7-szin-benziloximet:il-no:rborn-i2-én-5-olt állít elő egyenlő arányban. A várakozással egyezően a kromatográfiás úton elválasztott redukciós termékek 5-ös szekunder hidroxil-csoportját oxidálva a (±) 7-szin-benziloximetil^norborn-2--én-5-on optikai antipódjaihoz jutottunk, a (•+) exo-7-szin-benziloxirnetil-norborn-2-én-5-olból + 7-szin-benziloximetil^norborn-2-én-5~ont, .a (—) endo-7-szin-:benziloximetil-norborn-2-én-5--olból (—) 7-szin-benziloxinTetil-norborn-2-én-5--ont kaptunk. Ennek .megfelelően a találmány tárgya eljárás a (±) 7-szin-benziloximetil-norborn-2-én-5-on optikai antipódjainak előállítására, amely abban áll, hogy a ( + ) 7-szin^benziloxraietil-norborn-2-én-5-ont Saccharomyees dorosphylarum (MNG 92) törzzsel aerob körülmények között redukáljuk, és az így kapott endo-7-szin-benziloximetil-norborn-2-én--5-olt és az exo-7--szin-benziloximetil-norborn-2^én-5-olt egymástól kromatográfiás úton elválasztjuk, majd az elválasztott vegyületek 5-ös szekunder hidroxilcsoportjait oxo-csoportokká oxidáljuk. A (±) 7-szin^benz,iloximetil^norborn-2-én-5-on keton-csoportjának redukciójára alkalmasnak talált mikroorganizmusókat agar-agart, növényi eredetű fehérjét, pl. burgonyakivonatot, és szénforrásként valamilyen szénhidrátot, pl. glükózt tartalmazó szilárd táptalajon tenyésztjük. 2—10 napi 20—40 C°-on történő inkubálás után a mikroorganizmusok tenyészetét oltóanyagként használhatjuk 4—6 .hétig. A redukciót végző mikroorganizmus tömegtenyésztését aerob sülylyesztett kultúrában, rázott lombikban vagy f ermentorban végezhetjük 20—40 C° hőmérsékleten. A levegőztetés és keverés mértékét széles határok között lehet változtatni. Táptalajként növényi eredetű nitrogénforrást alkalmazunk, előnyösen 1—6% kukoricalekvárt. Szénforrásként használható bármilyen metabolizálha tó szénhidrát 2—5%-os koncentrációban. Jó ered-5 ményt érhetünk el szacharóz, glükóz vagy maltóz alkalmazásakor. A fentiek szerint elkészített, 120 C°-on, 1,2 atü nyomáson sterilezett táptalajt szilárd táptalajról lemosott sejttel, célszerűen Saccharomyees drosophylarum (MNG 10 92) szuszpenziójával oltjuk, és 24 C°-on inkubáljuk. A tenyészet növekedését mikroszkópon ellenőrizzük. 16—24 órás inkubálás után a tenyészet eléri maximális biokémiai aktivitását. Ekkor adagoljuk az átalakítandó' szubsztrátu-15 mot 0,2—1 mg/ml koncentrációban vízzel elegyedő szerves oldószerben, célszerűen alkoholban oldva. Ezután az inkubálást az előzőleg leírt körülményekkel azonosan folytatjuk mindaddig, amíg a rétegkromatográfiás analízis sze-20 rint az átalakítás befejeződik, azaz a szubsztrátumként adagolt >( + ) 7-szin-benziloximetil-norborn-2-én-5-on teljesen redukálódik. A 'mikrobiológiai redukció során keletkezett , termékeket a fermentléből vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel, pl. klórozott szénhidrogénekkel vagy etilacetáttal extraháljuk. Az extrakcióval kinyert endo- és exo-7-szin-benziloximetil-norborn-2^én-5-Holok elválasztá-30 ' sara a preparatív vékonyrétegkromatográfiás és oszlopkromatográfiás eljárások egyaránt alkalmazhatók. A preparatív vékonyrétegkromatográfiás elválasztásoknál szilikagél tartalmú adszorbenst, előnyösen Kieselgél G (Reanal, Buda-35 pest) és Kieselgél HF254+366 (Merck, Darmstadt) adszorbensek 2:1 arányú keverékét használtuk a réteg készítésére. A redukciós termékek szerkezetét az alábbi 40 vizsgalatokkal támasztottuk alá. A termékek infravörös színképében nem jelentkezik a kiindulási vegyületként alkalmazott <( + ) 7-szin-be nziloxi:metil-noriborn-2-én-5-on infravörös színképében 1740 cm^-nél jelenlevő ketonsáv, 45 ehelyett hidroxilsávot találtunk. A termékek tömegspektruma alapján megállapított molekulasúly 230, kettővel nagyobb, mint a kiindulási anyagé. A mikrobiológiai redukció eredményeként létrejött alkoholok hidroxil-csoportja ecet-50 savanhidriddel piridines közegben szobahőmérsékleten acetilezhető volt. A hidroxil-csoport térállását a redukciós termékek és acetátjaik NMR-spektrumából állapítottuk meg, a hidroxil-, illetve az acetoxi-csoporttal azonos szén-55 atomon levő proton rezonancia jelét vizsgálva. Az endo-7-szm-benziloximetil-norborn-2-én-5-ol NMR spektrumában d — 4,45 ppm-nél, acetátjának NMR spektrumában d = 5,25 ppm-nél, az exo-7-szin-benzoiloximetil-no!rborn-2-én-5-ol 60 NMR-spektrumában d = 3,77 ppm-nél, acetátjának NMR-spektrumában d = 4,63 ppm-nél jelentkezett a Cs-ön levő proton rezonancia-jele, jó egyezésben a Wong és Lee által tanulmányozott, a 7-es szénatomon szubsztituálatlan nor-65 bornenolok és acetátjaik NMR-spektrumában 2