165546. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás egy dekapeptidamid előállítására
165546 3 4 kialakított komponensek kondenzációjával, olyan módón, hogy a racemizáció nem következik be. A találmány szerinti eljárással az I képletű dekapeptidamidot és savaddíciós sóit úgy állítjuk elő, hogy a II képletű Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH II hexapeptidet valamely III általános képletű H-Leu-Arg(X)-Pro-Gly-NH2 III — a képletben X redukcióval eltávolítható guanidin-védőcsoportot, előnyösen nitro-csoportot jelent — tetrapeptidamid-származékkal kondenzáljuk, majd a védőcsoport eltávolítása után a dekapeptidamidot kívánt esetben — ismert módon — savaddíciós só formájában izoláljuk. A találmány szerinti eljárás egy előnyös foganatosítási módja szerint a II képletű Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH II hexapeptidet kondenzáljuk a Illa. képletű H-Leu-Arg(N02 )-Pro-Gly-NH 2 Illa. (III általános képletben X = N02) tetrapeptidamid-származékkal, és a keletkező dekapeptidamid-származék nitro-csoportjának eltávolítása után az I képletű dekapeptidamidot, kívánt esetben valamilyen savaddíciós só formában izoláljuk. A találmány értelmében célszerűen úgy járunk el, hogy a II képletű hexapeptid-komponenst a karbobenzoxi-tirozil-glicinmetilészter (J. Beacham és munkatársai: J. Chem. Soc. 1967, 2520) hidrogénezésével nyert szabad jdipeptidészterből kiindulva a lépésenkénti peptidszintézis szabályai szerint építjük fel karbobenzoxi-szerinpentaklórfenilészter, karbobenzoxi-triptofánpentaklórfenilészter, dikarbobenzoxi-hisztid:Jn-2,4,5-triklórfenilészter és piroglutaminsav-2,4,5-triklórfenilészter felhasználásával olyan módon, hogy a Z-His(Z)-Trp-Ser-Tyr-Gly-OMe képletű — a képletben Z karbobenzoxi-csoportot és Me metil-csoportot jelent — védett pentapeptidészter intermedierről távolítjuk el a terminális észter-csoportot, tehát dekarbobenzoxilezés után a His-Trp-Ser-Tyr-Gly-OH képletű szabad pentapeptidet kondenzáljuk a piroglutaminsav aktív észterével. Az I képletű dekapeptidamid célszerű szintézisének Illa képletű tetrapeptidamid-komponensét előnyösen úgy állítjuk elő, hogy előbb a BOC-A:rg(N02)-Pro-ONB képletű — a képletben BOC terc.-butíloxikarbonil-csoportot és ONB p-nitrobenziloxi-csoportot jelent — védett dipeptidésztert építjük fel, majd átalakítjuk a Z-Leu-Arg(N02 )-Pro-ONB, illetve Z-Leu-Arg~ (N02 )-Pro-OH képletű tripeptid-származékká, melyet glicinamiddal kondenzálunk, és ezután a keletkező védett tetrapeptidamidról a karbobenzoxi-csoportot lehasítjuk. Az ilyen módon kapott Illa képletű H-Leu-Arg(N0 2)-Pro-Gly-NH2 tetrapeptid^komponenst valamilyen ismert oldószer, pl. a dicikldhexilkarbodiimid — pentaklórfenolos kondenzáció segítségével a II kép-5 létű hexapeptidhez kapcsoljuk, és a nitro-csoport eltávolítása után az I képletű dekapeptidamidot kívánt esetben savaddíciós só formában izoláljuk. A találmány értelmében úgy is eljárhatunk, 10 hogy a Illa képletű tetrapeptidamid-származékot glicinamidból kiindulva a lépésenkénti peptidszintézis szalbályai szerint építjük fel karbobenzoxi-prolin-p-nitrofenilészter, karbobenzoxi-nitro-arginin és karbobenzoxi-leucin segítségélo vei, majd a keletkező védett tetrapeptidamidról, a karbobenzoxi-csoportot lehasítjuk, és a szakadt N-terminálisú tetrapeptidamidot a II képletű hexapeptiddel kondenzáljuk. Ezután a keletkező termékről a nitro-védőcsoportot eltávolítjuk és az I képletű dekapeptidamidot kívánt esetben savaddíciós só formában izoláljuk. A találmány szerinti eljárás legfőbb előnye, hogy az I képletű dekapeptidamid szintézisét 2_ a rendkívül előnytelen racemizáció kiküszöbölésével teszi lehetővé. Az eljárás további előnye, hogy a felhasznált köztitermékek és a végtermék egyaránt egyszerű módszerekkel, kristályosítással vagy átoldással tisztíthatók és így 30 a végterméket a peptid-kémiában igen kedvezőnek minősülő kitermeléssel, a felhasznált aminosavakra számolva 20—30% hozammal lehet előállítani. A találmány szerinti eljárás foganatosítására 35 az alábbi kiviteli példákat adjuk meg: A példákban a hőmérsékleteket C°-ban adjuk meg. A képletekben szereplő rövidítések megegyeznek az előbbiekkel. Az R/-értékeket 40 rétegkromatográfiás módszerrel határozzu meg Kieselgel G adszorbensen (REANAL, Budapest) az alábbi oldószerekben: 1. etilacetát-piridin-ecetsav-víz 45 (30 : 20 : 6 : 11) 2. etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60:20:6:11) 3. etilacetát-piridin-ecetsav-víz (120 : 20 : 6 : 11) 50 4. etilacetát-piridin-ecetsav-víz (240 : 20 : 6 : 11) 5. etilacetát-piridin-ecetsav-víz (480 : 20 : 6 : 11) 6. n^butanol-ecetsav-víz i(4 : 1 : 1) 55 7. n-butanol-ecetsav-piridin-víz (4 -.1:1 : 2) 8. n-butanol-etilacetát-ecetsav-víz (1:1:1:1) Az elektroforetikus mozgékonyságot (E) 6,5 60 pH-n piridinacetátban határoztuk meg és hisztidinhez viszonyítottuk: EH/s 6,5. 1. példa: 65 1. lépés: H-Pro-Gly-NH2 -HOPCP 2
