165408. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-helyettesített 7béta-(D-5-amino-5-karboxi-vaIeramido)-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsav-származékok előállítására

43 M5408 44 B) A 810A antibiotikum-elegy elkülönítése Az A) alatt leírt fermentációs művelet 5. lépésében kapott fermentlevet, amelyet 36 órai fermentáció után különítettünk el és amelynek mennyisége 4800 liter, foszforsav hozzáadásával az eredeti 7—3 pH-értékről 3,0 pH-értékre állítjuk. A micéliumot szűrőprésen való átvezetés útján elkülönítjük és kiselejtezzük. Az" így leszűrt fermentlevet egy 450 liter Amberlite XAD—2 adszorbens gyantát tartalmazó ágyon vezetjük keresztül, percenként 45 liter áramlási sebességgel. A lefolyó levet az antibiotikum-aktivitás meghatározása után kiselejtezzük, majd a gyantaágyat kétszeres térfogatú vízzel mossuk, azután pedig 65%-os vizes metanollal eluáljuk a gyantát, percenként 23 liter áramoltatási sebességgel. 40, egyenként 23 liter térfogatú frakciót fogunk fel az eluálás során, é; ezekben is meghatározzuk az anttbiotitom-tartalmat. A 2., 40. frakciót egyesítjük, és a metanolt az egyesített oldatból elpárologtatjuk. Ily módon 190 liter koncentrátumot kapunk, ennek pH-értékét ammóniurnhidroxiddal 3,5-re állítjuk és fagyasztással tartósítva tároljuk. A fent leírt eljárás során kapott termékeket a szokásos korongeljárással vizsgáljuk antibiotikum-tartalom szempontjából, Proteus vulgaris mikroorganizmussal szemben. A leszűrt fermentlé (4800 liter) az aktivitásmeghatározás során az alábbi gátlási zónákat mutatta: Hígítás: 1:2 gátlási zóna átmérője 26,8 mm 1:4 23,8 mm 1: 8 21.1 mm Az adszorbens gyantaágyról távozó lé, valamint a gyantaágy mosására alkalmazott víz nem mutatott meghatározható mértékű antibiotikum-aktivitást. Az eluátumfrakciók a fent leírt aktivitásvizsgálat alkalmával a következő táblázatban megadott gátlási zónaátmérőket mutatták: Frakció: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17. 18. 19 20 Gátlási zóna, mim: 0 28 3i5 34 36 36 36 38 38 36 36 38 40 37 36 37 38 36 36 35 Frakció: 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 Gátlási zóna, mm: 33 33 34 34 33 34 32 33 32 32 32 30-30 30 28 27 28 26 26 26 35 40 60 65 hígítás gátlási zóna 1: 5 28,8 mm 1:10 27,0 mm 1:20 23,8 mm 1:40 21,0 mm hígítás gátlási zóna 1:16 27,25 mm 1:32 24,5 mm Az egyesített eluátummal, valamint a leírt módon kapott eluátumkoncentrátummal is végeztünk a leírt módon aktivitásmeghatározásokat; ennek során az alábbi eredményeket kap-5 tuk: Egyesített eluátum: 10 15 A 810A antibiotikumot tartalmazó eluátumkoneentrátum aktivitása: 20 A fent ismertetett fázistermékek összes szárazanyag-tartalma : 25 leszűrt fermentlé 119 kg egyesített eluátum (890 liter) 7,23 kg eluátumkoneentrátum (190 liter) 7,20 kg 30 C) Adszorbeáltatás anioncserélő gyantán A B) művelet során kapott koncentrátum 95 liternyi mennyiségét vízzel 141 liter térfogatra hígítjuk, majd a kapott folyadékot egy 22,5 liter gyengén bázisos anioncserélő gyantát tartalmazó ágyon (Amberlite IRA—68 gyanta kloridciklusban) vezetjük keresztül 4,0 pH-értéken, percenként 9 liter áramoltatási sebességgel. Ezután 45 liter mosóvizet vezetünk keresztül á gyantaágon, majd 1 mól nátriumnitrátot és 0,1 mól nátriumacetátot tartalmazó, 7,5 pH-értékű oldattal eluálunk, percenként 1,5 liter áramoltatási sebességgel. Tíz, egyenként 23' liter térfogatú frakciót fogunk fel, és ezek pH-értékét só-45 savval 4-re állítjuk be. Valamennyi frakcióban meghatározzuk az antibiotikum-aktivitást, a szokásos korongos módszerrel, Proteus vulgaris mikroorganizmussal szemben. A következő táblázatban megadott át-50 mérőjű gátlási zónákat kapjuk: Betáplált oldat: hígítás 55 1:10 1:20 1:40 gátlási zóna 28,5 mm 26,5 mm 24.0 mm Eluátumfrakciók, 1:10 arányú hígításban: Frakció: 1. 2. 3. 4. gátlási zóna: 27 mm 30 mm 28,5 mm 26 mm