165408. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-helyettesített 7béta-(D-5-amino-5-karboxi-vaIeramido)-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsav-származékok előállítására

165408 45 46 5. 6. 7. 8. 9. 10. Az ioncserélő ágyon átfolyatott lé hígítás nélkül 25 mm átmérőjű gátlási zónát, a mosóvíz padig hígítás nélkül 23 mm átmérőjű gátlási zónát 10 adott. 26 mim 25 mm 23 mm 22 mm 21 mm 17,5 mm D) Adszorbeáltatás anioncserélő gyantán A C) alatt leírt műveletben kapott 1—.10. frakciót egyesítjük, és egy 45 liter Amberlite XAD —2 gyantát tartalmazó ágyra visszük, 3,0 pH-érteken, percenként 5 liter áramoltatási sebességgel. Az antibiotikumot ezután 25% aceton és 7fS% víz elegyével eluáljuk, percenként 5 liter áramoltatási sebességgel. 16, egyenként \23 literes frakciót fogunk fel. Valamennyi frakció antibiotikum-tartalmát a szokásos korongmódszerrel vizsgáljuk, Proteus vulgaris mikroorganizmussal szemben. Az adszorbenságyra táplált 190 liter egyesített élüátum az alábbi gátlási zónákat mutatta: hígítás: 1: 5 1:10 1:20 gátlási zóna: 30 mm 27,5 mm 24,2 mm Az e műveletben kapott eluátumfrákciók a következő táblázatban megadott átmérőjű gátlási zónákat adták: 15 30 25 30 35 -valeramido)-3~(cMíietoxi-p-hidrQxi-cinnamóiloximetu)-7-metoxi~cef-3-em-4-karbönsav elegyébol áll. Ezt a száraz terméket ugyancsak a szokásos korongmódszerrel vizsgáljuk antibiotikum-aktivitás szempontjából; 320 meg/ml koncentrációban a termék 25 tóm átmérőjű gátlási zónát ad. E) 7ß-(D-5-amino-5-karboxi-valeramido)-3-^a-rnetoxi-p-hidroxi-cinnamoüoximetií)-7--metoxi-cef-3^em-4-karbonsav Egy 2,54 cm átmérőjű kromatográfiás oszlopot 100 cm magasságban megtoltunk DÉAE Sephadex A—25 anioncserélő gyantával, 0,5 mól ammóniumbromidot és 0,05 mól ecetsavat tartalmazó rendszerben. A D) műveletben kapott 810A antibiotikum 10,0 g mennyiségét 18 ml 0,5 mól ammóniumbromidot és 0,05 mól ecetsavat tartalmazó oldatban oldjuk, majd ezt az oldatot az oszlopra töltjük. Az eluálóoldatot óránként 81 ml áramlási sebességgel szivattyúzzuk az oszlopon keresztül, és önműködő készülék segítségével 10 ml térfogatú frakciókat fogunk fel. Az eluátumáramot differenciális refraktométerrel vizsgáljuk. A refraktométer regisztrálási adatai szerint a 19., 36., 79., 109. ás 206. csőben kapunK anyag-csúcsértékeket. Minden harmadik frakciót aktivitási vizsgálatnak vetünk alá a szokásos korongmódszerrel, 1,2 mm átmérőjű korongok alkalmazásával, 7,0 pH-értékre pufferolt közegben, Proteus vulgaris mikroorganizmussal szemben. Az ily módon vizsgált frakciók közül az 1—66. frakció 0 aktivitást mutatott, a további frakciók pedig a következő táblázatban megadott átmérőjű gátlási zónákat adták: frakció: hígítás gátlási zóna 1. 1:10 20,5 mm 2. 1:10 29 mm 3>. 1:10 29 min 4. 1:10 29 mm 5. 1:10 28 mm 6. 1:10 27 mm 7. 1:10 26 mim 8. 1:10 26 mm 9, 1:10 25 mm 10. 1:10 26,5 mm 11. 1: 5 26 mm 12. 1: 5 28 mm 13. 1: 5 27,5 mtm 14. 1: 5 25 mm 15. 1: 5 25 mm 16. 1: 5 24.5 mm A fenti 2—16. frakciót egyesítjük, az acetont elpárologtatjuk vákuumban, és így egy 17,4 liter végső térfogatú koncentrátumot kapunk. Ennek pH-értékét ammóniumhidroxid hozzáadásával 4,0-ra állítjuk, majd fagyasztva szárítjuk. Ily módon 620 g 81QA antibiotikumot kapunk, amely 7^-(D-5-amino-5-ikarboxi-valeramido)-3-(a-metöxi-p-szulfoxi-cinnamoiloximetil)-7-metoxi-eef-3-em-4-karbonsav és 7/?-(D-5-amino-5-'karboxi-40 Frakció Zóna Frakció Zóna Frakció Zóna átm. átm. átm. mm mm mm 45 50 55 60 69. 1» 122. .29 204. 40 + 72. 24 125. 28 207. 40 -f-75. 26 128. 27 210. 40 + 78. 31 131. 26 213. 40 + 91.. — 134. 24 216. 40 H-83. 35 137. • 21 219. 40 86. 37 140. 20 222. 38 89. 38 150. 18 225. 35 92. 38 160. 20 228. 32 95. 40 + 170. 29 231. 31 98. 40 + 180. 35 234. 27 101. 40 + 183. 38 237. 24 104. 40 + 186. 40 240. 23 107. 40 + 189. 40 + 243. 19 110. 40 + 192. 40 + 246. 17 113. 40 195. 40 + 249. 0 116. 38 19|8. 40 + • 252. 0 119. 33 201. 40 -f 65 A fenti 80—113. frakciót egyesítjük és ugyancsak egyesítjük a 170—230. frakciót is. A fent leírt frakcionálási műveletet megismé-