165408. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-helyettesített 7béta-(D-5-amino-5-karboxi-vaIeramido)-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsav-származékok előállítására
165408 39 3. példa A 810 A antibiotikum előállítása Egy MA—4125a Streptomyces griseus liofilizált kultúrát tartalmazó kémcsövet aszeptikus körülmények között kinyitunk, és a kémcső tartalmát a következő összetételű tápközeget tartalmazó ferde agar táptalajokra visszük: IV. tápközeg: 40 V8 gyümölcslé (8-féle vegyes gyümölcsből) 100 ml szójaliszt (Staley-féle 4S) 20,0 g dextróz 2,0 g agai-25,0 g desztillált vízzel feltöltve 1000,0 ml-re pH-érték 7,9—8,0. A fenti ferde táptalajokon kapott kultúrákkal azután beoltunk néhány 250 ml-es Erlenmeyer-lombikot, amelyek mindegyike a következőkben megadott V. tápközeg 50 ml mennyiségét tartalmazza. V. tápközeg: 10.0 g 10.0 g 2.0 ml 0,05 g 1000,0 ml élesztő-autolizátum (Ardamine) glükóz foszfát-puffer MgS04 . H 2 0 desztillált víz pH-érték nátriumhidroxiddal 6,5-re állítva. A foszfát-pufferoldat összetétele: KHoPO^ 91,0 g Na2 HP0 4 95.0 g desztillált víz 1000,0 ml A beoltott lombikokat 28 °C hőmérsékleten egy napig rázatjuk percenként 220 fordulattal. Az így inkubált lombikok tartalmát azután arra használjuk fel. hogy beoltunk 39 250 ml-es Erlenmeyer-lombikot, amelyek mindegyike 40 ml mennyiségiben tartalmazza a következőkben megadott összetételű VI. tápközegiet; a beoltáshoz lombikonként 3,5 ml inokulumot alkalmazunk. VI. tápközeg: 10 15 20 szeöntjük, egy kivett hányadrésznyi mintát aktivitásmeghatározásra használunk fel, míg a fermentációs termék fennmaradó részét extrakciókísérletekhez használjuk fel. Az elemzés céljaira kivett mintát sósavval 4,0 pH-értékre savanyítjuk, majd szűrjük, 5,0 pH-értékű foszfát-pufferoldattal 1 : 4 arányban hígítjuk, majd a szokásos korongmódszerrel vizsgáljuk, 12 mm átmérőjű korongok alkalmazásával, Proteus vulgaris MB—838 törzzsel szemben. A kapott gátlási zónák átmérője 26,5 mm. A termékben levő hatóanyagot 810A antibiotikumként azonosítottuk: ez a termék azonban főként 7/í-(D-5-amino-i5-karboxi-valeramido)-3-(a-metoxi-p-szulfoxi-cinnamoik>ximetil)-7-<metoxi-cef_ -3-em-4-karbonsavból állt, amely mellett csupán nyomnyi mennyiségben volt jelen a 7i?-(B-5--amino-5-karboxi-valeramido)-3-(«-metoxi-p-hidroxi-cinnamoiloximetil)-7-metoxi-cef-3-em_ -4-karbonsav. 4. példa 25 A 810A antibiotikum előállítása A 3. példában említett V8 tápanyaggal készített ferde agaros táptalajon tenyésztett MlA— 4125A Streptomyces griseus kultúrával beoltunk 30 egy 250 ml-es Erlenmeyer-lombikban levő 50 ml V. tápközeget (ennek összetételét a 3. példában ismertettük). A lombikot azután egy napig inkubáljuk 28 "C hőmérsékleten, egy 220 percenkénti fordulat-35 számmal működtetett rázókészüléken. Az így kapott vegetatív inokulumból 3 ml mennyiséget használunk fel egy 250 ml-es Erlenmeyer-lombikban levő 50 ml szintetikus VII. tápközeg beoltására, ennek a tápközegnek az összetétele a következő: 40 45 50 kukoricalekvár (nedves anyagra számítva) 40.0 g dextróz 20,0 g nátriumklorid 2,5 g MgSO<. 7HoO 0,5 gAiter 55 „poliglikol 2000" 0,25 tf% (ez utóbbi anyagot külön adjuk mindegyik lombikhoz) desztillált víz 1000.0 ml pH-érték nátriumhidroxiddal 7,0-ra állítva. 60 A fenti termelő lombikokat beoltás után 40 óra hosszat inkubáljuk 24 °C hőmérsékleten, egy 5 cm löketű rázókészülékben. percenként 220 fordulattal. Ezután a lombikok tartalmát ösz- 65 VII. tápközeg: L-aszparagin L-hisztidin nátriumklorid dikáliumhidrogénfoszfát CaCl2 . 2H 2 0 MnS04 . H2 0 FeSO,,. 7H2 0 ZnSO,. 7H2 0 MgSOi. 7H2 0 glicerin szacharóz desztillált víz pH-érték nátriumhidroxiddal 7,0-ra állítva. A beoltott lombikot 1 napig rázattuk 28 °C hőmérsékleten, percenként 220 fordulattal működtetett rázókészüléken. Az így kapott szintetikus inokulumot azután néhány 250 ml-es Erlenmeyer-lombikba elhelyezett 38—38 ml termelő VII. tápközeg beoltására használtuk fel; egy-egy lombikba 1,5 ml inoku-5,0 g 4,0 g 5,0 g 2,0 g 0,4 g 0,1 g 0,1 g 3,05 g 1,0 g 20.0 g 2,5 g 000.0 ml
