165408. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-helyettesített 7béta-(D-5-amino-5-karboxi-vaIeramido)-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsav-származékok előállítására

16S408 31 élesztákivonatot tartalmazó tápközegben volt inkubáltatva. Az így kapott készítménynek az említett háromféle ismert antibiotikummal, valamint 810A antibiotikummal szembeni inaktiváló hatását Vibrio percolans MB—1272 törzs felhasználásával határoztuk meg a fentebb leírt módon. A kapott eredményeket a következő táblázat tartalmazza: Inaktiválási százalék Aerobacter cloacae MB—2646 törzzsel való 2 órai inkubálás után, V. percolans MB—1272 lemezeken mérve 32 Antibiotikum Inaktiválási % 81OA cefalotin cefaloridin C-cefalosporin 16 66 96 96 A fentebb leírttal egyező módon történő számítás alapián, az alábbi táblázatban megadott viszonylagos rezisztenciaértékeket kaptunk a 810A antibiotikumnak az Aerobacter cloacae mikroorganizmus általi enzimes inaktiválással szembeni rezisztenciájára vonatkozólag. A kiindulóoldat koncentrációja 250 mcg/ml volt; az eredményeket ugyancsak mcg/ml értékekben adtuk meg: Megmaradó antibiotikum-aktivitás az Aerobacter cloacae sejtmentes kivonatával való 2 órai inkubáció után Antibiotikum Mikroorganizmus Megmaradó (a meghatározáshoz) aktivitás mcg/ml 81'OA B. subtiiis MB—964 190 cefalotin ., 140 cefaloridin ,, 10 alatt 810A V. percolans MB—1272 210 cefalotin .. 85 cefaloridin ., 10 alatt Amíg a fenti táblázat adatai is bizonyítják, a 810A antibiotikumnak az Aerobacter cloacae általi inaktiválással szembeni rezisztenciája nagyobb, mint a C-cefalosporin, cefalotin és cefaloridin antibiotikumoké. A 810A antibiotikum és sói hatásosan gátolják a Salmonella mikroorganizmus különféle törzseinek fejlődését; ezek az antibiotikumok jól alkalmazhatók fertőtlenítőszerekként különböző háztartási és ipari alkalmazásokban is. Így pl. a 810A antibiotikum hatásos a Salmonella schottmulleri és a Salmonella gallinarum ellen; a tulajdonságaik alapján ezek a termékek értékes fertőtlenítőszerek háztartási és ipari alkalmazásban. Az antibiotikumok elkülönítése és tisztítása 810A antibiotikum: A 810A antibiotikum tisz-10 títása ioncserélő gyantán való adszorpció útján történhet; erre a célra pl. dextrózból vagy akril-kopolimerekből kapott szintetikus anioncserélő' gyanták, vagy nemionos térhálós polimerek alkalmasak. Az abszorbeált antibiotikumot azután 15 eluáljuk a gyantáról; erre a célra vizet vagy valamely alkalmas só, mint ammóniumklorid, nátriumklorid vagy hasonló vizes-alkoholos oldatát alkalmazzuk. Az eljárás céljaira alkalmas ioncserélő gyanták példáiként a DEAE Sephadex 30 A-Amberlite IRA—68 és Amberlite XAD —2 említhetők. Kívánt esetben az így kapott eluátumot tovább tisztíthatjuk egy második és esetleg harmadik adszorpciós és eluálási műveletben. Az eluátumokból kapott koncentrátumo-25 kat használjuk fel a tisztított termék kinyerésére. A 810A antibiotikum alkotórészei: A 810A antibiotikumot kromatográfiás úton bonthatjuk szét alkotórészeire, amelyek a következők: lß-30 -(D-5-amino-5-karboxi-valeramido)-3-(a-metoxi-p-szulfoxicinnamoiloximetil)-7-metoxi-cef-3--em-4-karbonsav és 7/^(D-5-amino-5-karboxi~ -valeramido)-3-(a-metoxi-p-hidroxi-cinnamoiloximetiI)-7-metoxi-cef-3-em-4-karbonsav. (E két "° vegyület mennyiségi aránya 65:35 és 35:65 között lehet.) 1. Kromatografálás erősen hidrofil anionc-erélő gyantán, pl. DEAE Sephadex A—25 gyantán; előhívás ammóniumbromid-hangyasav rendszer-40 rel. Ez a rendszer különféle koncentrációkban alkalmazható, a gyakorlatban azonban előnyös a 0,5 mól am.moniumbrom.id

— 0,1 mól hangyasavoldatból álló rendszer alkalmazása. (Megjegyzés: a DEAE Sephadex A—25 gyanta egy a 45 dextrán poliszacharidból nyert szintetikus anioncserélő gyanta klorid alakban: gyártója: Pharmacia Fine Chemicals, Inc., 800 Centenial Avenue, Piscataway,. New Market, New Jersey 08854.) 50 2. Kromatografálás gyengén bázisos anioncserélő gyantán, pl. Amberlite IRA—68 gyantán. Az antibiotikumot nyers alakban tápláljuk be az ioncserélő gyantára, kb. 3—3,5 pH-értéken, majd először savval, 2 körüli pH-értéken, majd nát-55 riumklorid és sósavoldat 1 körüli pH-értékű elegyével eluálunk. (Az Amberlite IRA—68 anioncserélő gyanta szintetikus termék, amely gyengén bázisos tercier aminocsoportokat tartalmazó térhálós akril-kopolimerből áll; gyártója a Rohm 60 and Haas Co., Philadelphia, Pennsylvania 19 105.) 3. Kromatografálás nemionos térhálós polisztirol-polimer adszorbensen, mint amilyen pl. az Amberlite XAD—-2. Az eluálást valamely er-65 re alkalmas vizes rendszerrel végezhetjük, álta-