165343. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 4-oxo- 4H- 1-benzopirán-2-IL-tetrazol-származékok előállítására
165343 21 22 hogy ez a vizsgálat alkalmas a vizsgált vegyületeknek az antitestantigén-reakciót gátló hatásának kvalitatív meghatározására. A vizsgálat során Charles River France/Fisons által tenyésztett patkányokat (hím és nőstény vegyesen) használunk, melyek testsúlya 100 és 150 g között van, és ezeket szubkután, hetenkénti időközökben Nematoidea brasiliensis, a továbbiakban N. brasiliensis lárvákkal fertőzzük meg, kb. 2000-12 000 lárvával állatonként. 8 hét múlva az állatokat megsebezzük, és mindegyiktől 15—20 ml vért veszünk. A vérmintákat ezután 3500 rpm fordulatszámmal 30 percig centrifugáljuk, hogy eltávolítsuk a vértesteket a vérplazmától. A szérumot egyesítjük, és ezt használjuk fel a vizsgálat során N. brasiliensis antitest-szérumként. Egy tájékoztató érzékenységi kísérletet végzünk, hogy megállapítsuk a szérumnak azt a legkisebb mennyiségét, amely a kontrollállatokban a vizsgálat leírt módszerében a bőrön 2 cm-nél kisebb átmérőjű hólyagosodást okoz. Ugy találtuk, hogy a 100—130 g súlyú patkányok optimálisan akkor voltak érzékenyek, ha a szérumot 8 rész fiziológiás sóoldattal hígítottuk. Ezt a hígított oldatot nevezzük a továbbiakban A antitest szérumnak. Az A antitest-szérummal reagáló antigént úgy állítottuk elő, hogy a fertőzött patkányok beléből eltávolítottuk az N. brasiliensis férgeket, a homogenizátumot centrifugáljuk, és a felül elhelyezkedő folyadékot összegyűjtjük. Az így kapott folyadékot 1 mg/ml proteinkoncentrációra hígítva kapjuk a B oldatot. 100-130 g súlyú, Charles River France/Fisons által tenyésztett patkányokat bőrön keresztül injekcióval 0,1 ml A szérummal fertőztük meg a jobb oldalukon. Az érzékenységet 24 órán át hagytuk kifejlődni, majd a patkányokat 1 ml/100 g testsúly dózisban a következő összetételű eleggyel oltottuk be: 0,25 ml B oldat, 0,25 ml Evans Blue festékoldat, és 0,5 ml, különböző koncentrációjú hatóanyagoldat. Az oldhatatlan anyagokat külön adagoltuk, intraperitoneális injekcióként 5 perccel a B oldat és az Evans Blue intravénás adagolása előtt. Minden hatóanyagkoncentrációval 5—5 patkányt kezeltünk. Minden vizsgálathoz 5 patkányt használtunk kontrollként. A vizsgálandó anyag dózisait úgy választottuk meg, hogy azok gátlási sort adjanak. " Harminc perccel az injekció után a patkányokat elpuszítottuk, bőrüket lefejtettük és kifordítottuk. A túlérzékenységi reakció intenzitását úgy határoztuk meg, hogy a jellemző kék színű (az Evans Blue okozta) hólyagok méretét összehasonlítottuk a kontrollállatok elváltozásainak méretétől. A hólyagok méretét 0-tól 4-ig jelöltük (nem észlelhető elváltozás, vagyis 100%-os a gátlás, illetve nincs különbség a méretek között), és a százalékos gátlást minden dózis esetén a következőképpen számítottuk: %-°s _ (kontroll csoport érték-kezeit csoport érték)xl00 gátlás kontrol csoport érték Az egyes vegyületek különböző dózisaihoz tartozó gátlási értékeket grafikusan ábrázoltuk. Ezekből megállapítható a túlérzékenységi reakció 50%-os gátlásához tartozó dózisérték (ID 50 ). 5 B példa Tabletta I általános képletű vegyület, például 5-[8-allil-5-(3-metil-n-butoxi> 10 4-OXO-4H-1 -benzopirán-2-il]-tetrazolnátriumsó 50 mg Kötőanyag, például tragant 1 -3% Kenőanyag, például magnéziumsztearát 0,25—1% Szétesést elősegítő anyag, például burgo-15 nyakeményítő 5-10% Felületaktív anyag, példul di-oktil-nátrium-szulfoszukcinát. 0,25% C példa 20 Kemény kapszula I általános képletű vegyület nátriumsója 500 mg Granulálószer, például gumi vagy keményíti csiriz tetszés szerint Kenőanyag, például magnéziumsztearát 0,25—1% 25 D példa Lágy kapszula I általános képletű vegyület nátriumsója 500 mg Polietilénglikol 400 tetszés szerint 30 Nem-ionos felületaktív szer, például polioxietilén szorbitán monooleát tetszés szerint E példa I általános képletű vegyület nátriumsója 35 Bázis, például polietilénglikol 6000 Szabadalmi igénypontok: 500 mg lg 40 1. Eljárás az I általános képletű 4-oxo4H-l-benzopirán- vagy benzitiopirán-2-il-tetrazol-származékok és ezek bázisokkal képezett, gyógyászatilag alkalmazható sói előállítására, mely képletben Rs R 6 , R 7 és R8 azonos vagy egymástól eltérő és hidrogénatomot, 45 alkilcsoportot, halogénatomot, hidroxil-, alkenil-.fenilvagy alkoxicsoportot jelent, ahol az alkoxicsoport előnyösen alkoxi-, hidroxil- vagy tetrahidrofurfurilcsoporttal van helyettesítve és az alkil-, alkenil- és alkoxicsoportok 1—8 szénatomot tartalmaznak és W 50 jelentése oxigén- vagy kénatom, azzal jellemezve, hogy a) valamely II általános képletű vegyületet, ahol R egy IX általános képletű csoport, amelyben R5 R 6 R7 R 8 és W a fent megadott jelentésű és Y 55 danocsoport, valamely, a reakciókörülmények között inert oldószer jelenlétében egy aziddal reagáltatunk, vagy b) valamely VII vagy XIV általános képletű vegyület, ahol R jelentése a fenti, X benzil-, rövidszénláncú 60 alkanoilcsoport, vagy —(CH2 ) n —Z általános képletű 11
