165202. lajstromszámú szabadalom • Eljárás növénylebontó enzim előállítására

165202 8 15 20 A táblázat adataiból látható, hogy a találmány szerint Bacillus polymyxa-ból előállított enzimelegy pH = 7,0 értéken lényegesen nagyobb lebontó hatást gyakorol főzelékfélék sejtfalára, mint az ismert enzimkészítmények. Az enzimhatás a felhasznált enzimkoncentrációval nem lineárisan, hanem logaritmikusan változik. Ebből az a gyakorlat szempontjából fontos következtetés vonható le, hogy még igen kis enzimkoncentráció esetén is jelentős mértékű le- 10 bontást érhetünk el. A találmány szerint előállított enzim növényi anyagokra kifejtett lebontó hatása — a vizsgálati módszer hibahatárát figyelembe véve — még 0,003 mg enzim/ml homogenizátum-koncentrációnál is kimutatható, ugyanakkor az ismert enzimek esetében a lebontás kimutathatóságának határa 0,1 mg enzim/ml homogenizátum vagy annál nagyobb érték. Ezek az adatok azt jelzik, hogy az új enzim az ismerteknél csaknem két nagyságrenddel erősebb hatást fejt ki. A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül a következő példákban részletesen ismertetjük. 25 1. példa Csövekbe töltött ferde agar-táptalajt Bacillus polymyxa FH—K 890/3 törzzsel (ATCC 21551) oltunk be. A táptalaj összetétele a következő: 0,1% élesztőkivonat 0,1% malátakivonat 1,0% löszagyag 0,1% húskivonat 2,5% kazein-pepton 0,01% triptikáz 0,5 % glükóz 0,01% szójaolaj 0,5% kukoricalekvár 40 1,0% CaC03 1,0% nádcukor 1,0% szójaliszt 1,0%. keményítő 1,8% agar pH = 6,0—6,8 45 A beoltott táptalajokat 3 napon át 28 °C-on, majd további 5 napon át szobahőmérsékleten tartjuk, amíg teljes mértékű spórásodás lép fel. A spórás anyagot 10 ml steril desztillált vízzel 50 vagy fiziológiás konyhasóoldattal lemossuk a ferde tenyészetről. 5—5 ml így elkülönített anyaggal 300 ml-es Erlenmeyer-lombikokba töltött 100—100 ml steril táptalajokat oltunk be. A táptalaj pH-értéke 7,0, és összetétele a következő: 2,0% szacharóz 0,4% kazein-pepton 0,4% húskivonat 0,1% élesztőkivonat 60 0,1% máj kivonat ad 1000 ml víz A lombikokat 24 órán át 30 °C-on 200 fordulat/perc sebességű rázógépen rázzuk. Ezután 65 30 35 az előtenyészetből 5—5 ml-es részleteket különítünk el, és az elkülönített részleteket steril körülmények között 20 db Erlenmeyer-lombikba töltjük. Az egyes lombikok 50—50 ml, a következő összetételnek megfelelő táptalajt tartalmaznak: 0,5% szójaliszt 0,75% keményítő 0,5% kukoricalekvár 0,05% száraz cefre 0,005% triptikáz 1,0% kazein-pepton 1,0% keményítőcukor 0,25%) nátriumklorid ad 1000 ml víz, pH = 7,2 A főfermentáció a fenti módon beoltott lombikokban zajlik le. A lombikokat 2—3 napon át 28 °C-on 200 fordulat/perc sebességű rázógépen rázzuk. A tenyésztés második és harmadik napján meghatározzuk a tenyészet PATE-tartalmát. A meghatározás céljából a fermentlé mintáját a sejtekből és a szilárd anyagoktól élesre szűrjük, és a felső folyadékrétegben spektrofotométerrel, 235 m« hullámhosszon meghatározzuk a pektinsav hasadásakor képződő kettős kötések mennyiségét. Egy enzimegység annak az enzimmennyiségnek felel meg, amely a kísérleti körülmények között 10 perc alatt 0,1 értékű extinkciónövekedést idéz elő. A Bacillus polymyxa ATCC 21551 törzs tenyésztésekor a főfermentáció harmadik napján átlagosan 1500—2000 egység/ml koncentrációjú fermentleveket kapunk. A fermentlevek végső pH-értéke 7,8. 2. példa Az 1. példában leírt módon járunk el azzal a különbséggel, hogy 1 literes Erlenmeyer-lombikokba töltött 250—250 ml tápoldatokat alkalmazunk, és a tápoldatokat 25—25 ml csíraszuszpenzióval oltjuk be. A tápoldat összetétele a következő : 4,0% glükóz 2,0% szójaliszt 0,2% ammóniumszulfát 0,75% kalciumkarbonát ad 1000 ml víz, pH = 7,0 A tenyészetet 3 napon át 28 °C-on tartjuk, és 220 fordulat/perc sebességű rázógépen rázzuk. 55 A tenyésztés végén a fermentlé pH-értéke 7,8, enzimtartalma 4500 egység/ml. 3. példa Az 1. példában leírt módon járunk el azzal a különbséggel, hogy a főtenyésztést 30 liter össztérfogatú fermentorban végezzük, amely 10 liter steril táptalajt tartalmaz. A táptalaj öszszetétele a következő: