165199. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fungi imperfecti törzsek extracelluláris pektinázhemicelluláz- és celluláz képzésének fokozására
169199 3 4 (M'NG 96) törzsek extracelluláris pektináz-, hemicelluláz- és éellulázképzésének fokozására, melynek során a táptalajhoz 0;02—1,00 súlyszázaléknyí mennyiségben TBP-ot adunk. A találmány szerinti eljárás egy előnyös foganatosítási módja szerint a TBP-ot lanolinos orsóolajban szuszpendálva, célszerűen a következő összetételű alakban adagoljuk a tenyészetekhez: 10 sr. TBP 90 sr. lanolintartalmú orsóolaj. A tenyésztés befejezése után a fermentleveket betöményítjük, és a termelt enzimeket a fermentléböl izoláljuk és tisztítjuk. A találmány szerinti eljárás előnye, hogy lehetővé teszi az extracelluláris celluláz-, hemicelluláz- és pektinázmennyiségének lényeges növelését. A TBP adagolásának további előnye, hogy amellett, hogy a tenyészetek extracelluláris enzim-termelőképességét fokozza, felületaktív és mint ilyen, egyben habgátlóként is alkalmazható. A TBP akkor hatásos, ha- a -táptalajba inokulálás előtt adjuk, illetve ha a tenyészethez a növekedés során adagoljuk. Az eljárással magas enzimtartalmú fermentleveket lehet előállítani. A találmány szerinti eljárást a következő kiviteli példákban részletesen isimertetjük. Az enzimaktivitás-mérést viszkozimetriásan végeztük az alábbi szubsztrátokon és körülmények között: Pektinázaktivitás: 30 °C-on pH = 4-en, 0,4%os almapektin szubsztráttal. Hemilcelluláz-aktivitás: 40°C-on pH = 5,3-en 1%-os xilogalaktoarabán szubsztráttal (búzaszalmából preparált), illetve 0,6%-os galaktomannánnal (lucernamagból preparált). Cellulázaktivitás: 40 °C-on pH = 5,0-bn 0,5%os karboximetilcellulóz szubsztráttal. AlmaJé-derítőfcépesség: Frissen készített almalén, 40 °C hőmérsékleten és az almaié pH-ján. A fenti enzimek egységnyi aktivitásainak definíciója : Pektináz: 1 E az az enzimmennyiség, amely a fenti körülményék között a pektinoldat viszkozitását 15 perc alatt 50%-kal csökkenti. Hemicelluláz: 1 E az az enzim-mennyiség, amely a fenti körülmények között a hemicellulóz- (xilogalaktoarabán-, illetve galaktomannán-) oldat viszkozitását 20 perc alatt 25%^kal csökkenti. Celluláz: 1 E az az enzimmennyiség, amely a fenti körülmények között a viszkozitást 20 perc alatt 50%-kal csökkenti. Almaderítő-aktivitás: 1 E az az enzimmennyiság, amely a fenti körülmények között az almalé 75%-os derítéséhez szükséges. 1. példa Az alábbi összetételű PT—1 jelű táptalajt készítjük. 100 ml táptalajban az egyes anyagok mennyisége a következő: 1,5 g cukorrépaszelet 2,0 g búzakorpa 5 2,0 g ammóniumszulfát 0,25 g KH2 P0 4 •0,2& g élesztőkivonat A tápoldat pH-ját 3,8 értékre állítjuk be, majd 500 ml-es Erlenmeyer-lombikba 100—100 10 ml-t mérünk be, és 40 percig 121 °C-on nyomás alatt kezeljük. Sterilezés után a pH változatlan. Az egyes lombikokhoz steril körülmények között az előbbiekben megadott koncentrációkban káliumdihidrogén-foszfátot, foszfotidil-inozitot, ill. 15 TBP-ot adunk. A TBP összetétele: 10% tributilfoszfát 25% lanolin 6,5% orsóolaj A lombikokat 1—1 ml, egyhetes ferde burgo-20 nya-agarról lemosott Aspergillus ochraceus (MNG 94) spóraszuszpenzióval oltjuk be, majd 28 °C hőmérsékleten 260 fordulat/perc löketszámú rázógépen 5 napig rázatjuk. Ezután mindegyik lombikban megmérjük a pektináz- és he-25 micelluláz-aktiyitást (galaktomarihán szubsztráttal), valamint az almaiéderítő aktivitást. Az eredményeket az 1. táblázat mutatja be. 30 55 1. táblázat Adagolt anyag Enzimaktivitás (E/ml) koncent. Alma, rációja a táp-Pekti- ,ml ~ derítő-35 megnevezése telajban náz cellu- képes _ (g/100 ml) iaz ség Adalékanyag Anorganikus foszfát Foszfatidil-inozit nélkül 0,3 0,4 0,1 0,2 140 3,0 200 40 Adalékanyag Anorganikus foszfát Foszfatidil-inozit nélkül 0,3 0,4 0,1 0,2 145 145 3,5 3,5 250 230 Adalékanyag Anorganikus foszfát Foszfatidil-inozit nélkül 0,3 0,4 0,1 0,2 150 150 4,5 4,0 3,0 6,0 285 350 45 TBP 0,02 0,5 170 150 4,5 4,0 3,0 6,0 400 500 A táblázatból látható, hogy a TBP jelentősen növelte az Aspergillus ochraceus hemicelluláz-50 és pektináztermelését, és ez különösen az almaderítést befolyásolta kedvezően. 2, példa Az alábbi összetételű C—-2 jelű táptalajt készítjük; 100 ml táptalajban az egyes anyagok •mennyiség a következő: 5 g búzakorpa 60 0,8 g NH 4 N0 3 0,4 g Na2 HPQ 4 0,1 g MgS.O4.7H2O 0,02 g kukoricalekvár 65 0,5 ml„B" elemoldat
