165199. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fungi imperfecti törzsek extracelluláris pektinázhemicelluláz- és celluláz képzésének fokozására
165199 A „B" elemoldat összetétele: 5,4 mg/ml FeCl 3 2,4 „ (NH4 )P (Mo 3 O 10 ) 4 5,0 „ ZnS04 . 7H 2 0 0,25 „ CuS04 . 5H 2 0 0,55 „ MnS04 5,7 „ H3BO3 A táptalaj pH-ját 6,0-ra állítjuk be, majd 500 ml-es Erlenmeyer-lombikokba mérjük 100 mlenként, és 40 percig 121 °C-on kezeljük. Sterilezés után a pH 6,1. Az egyes lombikokhoz steril körülmények között különböző mennyiségben dinátrium-Jhidrogén-foszfátot, illetve foszfatidil-mozitot, illetve, az 1. példában megadott összetételű TBP-ot adunk. A lombikokat 1—1 ml, egyhetes ferde burgonya-agárról lemosott Aspergillus niger {MNG 96) spóraszuszpenzióval oltjuk be, majd 24 °C hőmérsékleten 260 fordulat/perc löketszámú rázógépen 5 napig rázatjuk. Ezután mindegyik lombikban megmérjük a hemicelluláz-aktivitást. Az eredményeket a 2. táblázatban mutatjuk be. 2. táblázat Adagolt anyag koncentrá- Enzimaktivitás ciója a táp-( (E/ml) talajban (hemicelluláz) (g/100 ml) megnevezése Adalékanyag Anorganikus foszfát Foszfatidil-inozit TBP nélkül 0,3 0,4 0,1 0,2 0,02 0,5 1,0 125 130 12» 128 135 130 150 140 10 15 20 25 30 35 40 készülékben mért szulfitszám 0,8—1,2 között legyen. Az inokulumfermentáció hőmérséklete 28 "C. A 48 óra eltelte után az inokulum 50—50 miével oltunk be két, a 2. példában megadott öszszetételű C—2 táptalajt tartalmazó 1 m3 -es fermentort, mely habgátlóként lanolin-orsóolaj elegyet tartalmaz (0,5%) (A és B f érmen tor). Az „A" fermentorhoz sterilezés előtt 0,1% TBP-ot adtunk. A fermentációt 24 °C hőmérsékleten végezzük levegőztetés és keverés mellett. Szulfitszám: 0,8—1,2. A fermentációk hemicelluláz-aktivitása maximuma ugyanabban az időben — 115 óra után — jelentkezik; az aktivitás az „A" fermentorban 187 E/ml, a „B" fermentorban pedig 128 E/ml. 4. példa A 2. példa szerinti eljárást ismételjük meg azzal a különbséggel, hogy mikroorganizmusként Aspergillus niger helyett Triohoderma viride (MNG 97) törzset használunk, és az aktivitásokat a 4. napon mérjük. Az eredményeket a 3. táblázat ismerteti. Az aktivitásértékeket mindkét hemicelluláz-szubsztrát esetére megadjuk. „XGA" xilolgalaktoarabánbontó aktivitást, „GM" galaktomannánbontó aktivitást jelent. 3. táblázat Látható, hogy TBP adagolása mellett a hemicelluláz-termelés kb. 20%-kal nagyobb, mint adalékanyagok alkalmazása nélkül. A foszfát, illetve foszfatidil-inozit adagolás jóval kisebb mértékben hat az enzimképződésre. 3. példa 100 literes fermentorban az alábbi összetételű inokulum-táptalajt készítjük; 100 ml táptalajban az egyes anyagok mennyisége a következő: 5 g glükóz 1,0 g NH4NO3 1,0 g kukoricalekvár (50% szárazanyag-tart.) 0,5 g CaC03 0,05 g tributilfoszfát 0,05 g KH2PO4 0,25 g MgS04 . 7>H 2 0 0,1 g KNO3 A táptalajt 150 ml Aspergillus niger (MNG 96) spóraszuszpenzióval oltjuk be. A tenyészetet 48 órán át levegőztetjük és keverjük úgy, hogy a 45 megnevezése Adalékanyag koncentrációja a táptalajban (g/100 ml) Enzimaktivitás (E/ml) XGA GM Adalékanyag Anorganikus foszfát Foszfatidil-inozit TBP 50 nélkül 0,3 0,4 0,1 0,2 0,02 0,5 1,0 35 38 32 38 40 38 66 23 20 21 2« 35 25 55 4-3 Látható, hogy a TBP-adagolás mellett a hemicelluláz-termelés 80—100%-kal (XGA-bontó 5g aktivitás), illetve 100—>200%-kal (galaktomannánbontó aktivitás) emelkedik. 5. példa 60 A 3. példa szerinti eljárást ismételjük meg azzal a különbséggel, hogy mikroorganizmusként Aspergillus niger helyett Trichoderma viride (MNG 97) törzset alkalmazunk, és a főfermentációt 4 napig végezzük. A fermentációk leállási 65 értékeit a 4, táblázat mutatja.
