165192. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új antibiotikum előállítására

16519G Glicerin-aszparagin-agar (ISP No. 5): Erőteljes növekedés, narancs (10P7), oldódó színanyag nincs. Glicerin-glicin-agar: rendkívül gyenge növekedés, oldódó színanyag nincs. Bennett-agar: Jó növekedés, szürkés-vörösesnarancs (11A8), oldódó színanyag nincs. Paradicsom-zabpehely-agar: Erőteljes növekedés, barnásnarancs (12B9), barna színű oldódó színanyag. Tirozin-agar: Jó növekedés, világosszürkesárgás-barna (13B3), oldódó színanyag nincs. Élesztőkivonat-agar: közepes növekedés, intenzív sárgásbarna (13H8), barna színű oldódó színanyag. Glükóz-aszparagin-agar: Erőteljes növekedés, halványnarancs-sárga (9E7), oldódó színanyag nincs. Kalcium-malát-agar: Igen gyenge növekedés, oldódó színanyag nincs. Burgonyakivonat-agar: Gyenge növekedés, halvány narancssárga (12B3), halványbarna színű oldódó színanyag. Emerson-agar: közepes növekedés, barna (7'E11), oldódó színanyag van, színe sötétvörösbarna. Fizikai tulajdonságok Fölözött tej: Sem koaguláció, sem tisztulás nem figyelhető meg 21 napig, világosbarna színanyag. Nitrátredukció: pozitív. Zselatinpróba: 21 nap alatt teljes elfolyósítás figyelhető meg. Melanintermelés: 24 óra után pepton-vasagaron (ISP'No. 6): pozitív. Hőmérsékletigény Glicerin-aszparagin-agar: 26 °C és 37 °C közötti hőmérsékleten közepes-erőteljes növekedés. 43 °C hőmérsékleten nincs növekedés. Az A 477 jelű antibiotikumot termelő Actinoplanes sp. NRRL 3884 jelű törzs szénforrás-értékesítő spektrumát a 4. táblázatban adjuk meg. A táblázatban megadott jelek jelentései a következők : + = hasznosítja (+) = valószínűleg hasznosítja {—) = valószínűleg nem hasznosítja — = nem hasznosítja 4. táblázat Az Actinoplanes sp. NRRL 3884 szénforráshasznosítása Szénforrás Válasz Szénforrás Válasz Ramnóz (+) d-Xilóz + Cellobióz (+) d-Mannóz i Cellulóz Raffinóz i-Inozit — Szacharóz (-) Melecitóz — Maltóz (+) D-Fruktóz + L-Ar.abinóz + D-Dextróz + Laktóz + 10 15 20 Az A 477 jelű antibiotikum termelésére az Actinoplanes sp. NRRL 3884 jelű törzset táptalajon tenyésztjük. A tenyésztő táptalaj igen sokféle lehet, előnyösen azonban, a termelés gazdaságossága, a nagy mennyiségű hatóanyag keletkezése és annak könnyű elkülönítése érdekében bizonyos, meghatározott összetételű táptalajokat használunk. . így például szénforrásként előnyösen dextrózt, nitrogénforrásként szójalisztet használunk. Szervetlen sókként az általánosan használt, nátrium-, kálium-, ammónium-, kalcium-, foszfát-, klorid-, szulfát-, acetát- vagy karbonátionokra disszociáló sókat használjuk. Ezenkívül növekedési faktorokat tartalmazó anyagokat, például élesztőkivonatot adunk a táptalajhoz. Mint ahogy más mikroorganizmusok növekedéséhez és fejlődéséhez is szükségesek, az Actinoplanes sp. NRRL 3884 tenyésztő-táptalajához is hozzá kell adnunk az alapvető fontosságú nyomelemeket. A nyomelemeket szennyeződésként a táptalaj többi alkotórésze tartalmazza. A táptalaj pH-ja a tenyésztés kezdetén tág határok között változhat. Az inokulum-táptalaj 25 pH-ját, az egyes táptalajoktól függően, előnyösen 6,5 és 7,3 közé állítjuk be. A táptalaj pH-ja a tenyésztés végén legalábbis részben attól függően változik, hogy milyen volt a kezdeti pH-érték, milyen a táptalaj pufferkapacitása, to-30 vábbá attól az időtől, amely alatt a termelő organizmus növekedése gátolt volt. Nagy mennyiségű A 477 előállítására a termelő organizmust nagy térfogatú fermentorban levegőztetett, süllyesztett körülmények között te-35 nyésztjük. Rázott lombikos tenyészetben kis mennyiségű hatóanyagot állíthatunk elő. Ha a nagyobb térfogatú fermentorokat a termelő törzs spóraszuszpenziójával oltjuk be, az antibiotikum termelése csak hosszú lag-fázis után 40 indul meg, ezért előnyösen vegetatív inokulumot használunk. A vegetatív inokulum előállítására lombikban sterilezett kis mennyiségű táptalajt egy nem hosszú idő óta tárolt, növekvő szakaszban levő agartenyészetről nyert, spórá-45 kat vagy mieéliumfragmentumokat tartalmazó szuszpenzióval oltunk. A növekvő vegetatív tenyészettel oldjuk a fermentort. A vegetatív inokulum és a fermentor táptalaja azonos vagy különböző lehet. Az A 477 jelű antibiotikumot termelő organizmust 20 °C és 40 °C közötti, előnyösen 30 °C hőmérsékleten tenyésztjük. Az aerob, süllyesztett tenyésztés általános törvényének megfelelően, a táptalajon steril levegőt buborékoltatunk át. A termelő organizmus optimális növekedésére és a legnagyobb menynyiségű A 477-termelésére a táptalaj egységnyi térfogatára számítva percenként előnyösen 0,1 tárfogatnál több levegőt buborékoltatunk át a fermentoron. A fermentáció folyamán az antibiotikum termelődését biológiai értékméréssel kísérjük figyelemmel, az értékmérést egy, az antibiotikumra érzékeny mikroorganizmussal végezzük. Előnyösen Bacillus subtilis-t használunk tesztorganiz-50 55 60 65