165192. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új antibiotikum előállítására
165192 10 musként, a mérést ismert módon, papírkorongos agar-diffúziós módszerrel végezzük. A maximális hatóanyag-mennyiséget mind a fermentorokban, mind a rázott lombikos tenyészetben a fermentáció második és hatodik napja között mérjük. A legtöbb esetben &% aktivitást jelző görbe maximuma a 48. és 96. óra közé esik. Az A 477 jelű antibiotikumot extrakciós és adszorpciós módszerrel, különítjük el a tenyészléből és az esetleg jelen levő egyéb anyagoktól. Az A 477 elkülönítésére előnyösen úgy járunk el, hogy a hatóanyagot adszorbeálhatjuk, majd eluáljuk, így elkerülhetjük a viszonylag, nagy mennyiségű oldószer használatát, amely az extrakciós eljárás kísérője. Az antibiotikumot előnyösen aktív szénen kötjük meg és választjuk el a szűrt tenyészlétől, de használhatunk más általánosan használt adszorbenseket is. Az adszorbensen kötött hatóanyagot a szokásos eljárásokkal eluáljuk. Az A 477 további tisztítására, az adszorpcióra előnyösen használhatunk poliamidalapú gyantát, alumíniumoxidot, géleket és hasonlókat. A nyerstermékek tisztítására előnyösen használhatunk ioncserélő gyantákat is. A találmány szerinti eljárást a következő példákkal szemléltetjük. A példák a találmány oltalmi körét nem érintik. 20 25 30 1. példa Ferdeagaron Actinoplanes sp. NRBL 3884 jelű organizmust tenyésztünk. Az agar összetétele a következő: Előkezelt zabliszt (forgalmazott gyermektápszer) 60,0 g Élesztőkivonat 2,5 g K2 HP0 4 1,0 g Czapek-ásványisó-oldat 5,0 ml Agar 25,0 g Ionmentes víz 1 liter A Czapek-oldat a következő összetételű: KCl MgS04 . 7H 2 0 FeS04 . 7H 2 0 Ionmentes víz 100 g 100 g 2 g (2 ml tömény sósavban oldjuk). 1 liter 35 Glükóz , : 10,0 g Keményítő, '...:. ,20,0 g. Szójaliszt 20,0 g Élesztőkivonat. 2,0 g CaCoa 2,0 g Csapvíz 1,1 liter A beoltott vegetatív tenyészetet 72 órán át, 250 percenkénti fordulatszámú rázóasztalon 30 3 C 10 hőmérsékleten inkubáljuk. Ezután 10 ml inokulummal 100 ml, az alábbi összetételű táptalajt oltunk: 15 Glükóz 10,0 g Burgonyadextrin • . 20,0 g Szójaliszt 20,0 g Autolizált sörélesztő (AMBER BYF 300, 7,8% teljes N-tartalom) 3,0 g CaC03 4,0 g Csapvíz 1,1 li A tenyészetet 48 órán át 30 °C hőmérsékleten rázóasztalon (250 fordulat/perc) inkubáljuk. Ezzel a második vegetatív tenyészettel 250 ml-es Erlenmeyer-lombikfoan 30 ml, a következő öszszetételű, steril főfermentációs táptalajt oltunk: Dextróz Keményítő Mamiit Szójaliszt Autolizált sörélesztő (AMBER BYF 300) CaCO,, Csapvíz 1,0% 2,0% 1,0% 1,5% 0,1% 0,2% 1 liter A tenyészetet 30 °C hőmérsékleten, percenkénti 250 fordulatszámú rázóasztalon 72—120 40 órán át fermentáljuk. A tenyészet pH-ja a fermentáció végén 7,0—7,5. 2. példa 45 Az 1. példa szerinti eljárást ismételjük meg a második vegetatív tenyészet előállításáig. 200 ml tenyészettel 25 liter steril, a következő összetételű főfermentációs táptalajt oltunk: A táptalaj pH-ját nátriumhidroxid vizes oldatával 7,3-ra állítjuk be, majd 120 °C hőmérsékleten, 7,5—10 atmoszféra nyomáson 30 percen át sterilezzük. A táptalaj pH-ja sterilezés után 6,7. A ferdeagart Actinoplanes sp. NRRL 3884 jelű mikroorganizmussal oltjuk, majd 30 °C hőmérsékleten 7—10 napon át inkubáljuk. A növekvő micéliumot steril desztillált vízzel lemossuk, az agar felületét steril oltóeszközzel lekaparjuk. Mivel a tenyészet nem spórázik,, a felületet megfelelő eszközzel erőteljesen kaparjuk, ezzel növelhetjük a növekedési centrumok számát. Az így előállított szuszpenzió felével 50 ml, az alábbi összetételű steril táptalajt oltunk: 50 55 Dextróz 1,0% Keményítő 2,0% Mannit 1,0% Szójaliszt 1,5% Autolizált sörélesztő 0,1% (AMBER BYF 300) CaC03 0,2% Habzásgátló P—£000 (polipropilénglikol, Dow-Corning) 0,02% Víz 25 liter 60 A táptalaj pH-ját úgy állítjuk be, hogy az az autoklávban, 120 °C hőmérsékleten, 7,5—10 atmoszféra nyomáson és 30 percen át végzett sterilezés után 7,3—7,4 legyen. A 45 liter össztérfo-65 gatú fermentorban levő beoltott táptalajt 30 °C
