165079. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált 8-azapurin-6-onok előállítására
165079 9 táltuk, és 48 órával később az allergen anyagot Evans-féle kék színezékkel együtt intravénásán beadtuk. Az allergen anyag Tyrode-oldatban eldörzsölt Nippostrongylus brasiliensis ivarérett példányai homogenizátumának centrifugálásával kapott folyadékából állt. A PCA reakció helyeit az Evans-féle kék színezéknek a vérkeringésből ezekre a helyekre való szivárgása tette láthatóvá annak következtében, hogy azokból a sejtekből, amelyekben reagin-allergén kombináció előfordult, biológiailag aktív anyag szabadult ki, és ez a kapilláris permeabilitást fokozta. A reakció kifejlődését a találmány szerinti vegyületek megakadályozták, amikor azokat a patkányokba közvetlenül az allergen anyag befecskendezése előtt például 0,01—20 mg/kg adagban intravénásán vagy az allergen anyag intravénás injektálása előtt 15—25 perccel perorálisan, például 0,5—200 mg/kg mennyiségben beadtuk. Az új vegyületek a biokémiai próbákban gátolják a ciklusos adenozin-3'-5'-monofoszfátnak (ciklusos AMF) az emberi tüdő mikroszomatikus ciklusos nukleotid foszfodiészteráza által előidézett hidrolízisét. A próbát lényegileg a G. Brooker, L. J. Thomas és M. M. Applemen által leírt [Biochemistry 7, 4177 (1968)] módszerhez hasonlóan végeztük. Ebben a próbában a ciklusos 3H—AMP-ből emberi tüdőszövet mikroszómái hatására kapott 3 H-adenozin-5'-monofoszfátot 55 -nukleotidáz segítségével 3 H-adenozinná és foszfáttá alakítottuk át. A változatlan ciklusos 3 H— AMP adszorbeálására Dowex 2—X8 anioncserélő gyantát használtunk, ezáltal az enzimreakció lezárult, és az oldatban levő 3H-adenozint radioaktív szcintillációs számlálóval mértük. A használt módszer szerint sebészi műtéttel kapott, makroszkóposán normális emberi tüdőszövetből előállított mikroszómák, 10"7 mól ciklusos 3 H— AMP, 5 mól magnéziumszulfát, 0,1 mg/5'-nukleotidáz és egy találmány szerinti új vegyület 0,20 ml-nyi keverékét 0,1 mól trisz Mdroximetümetüammóniumhidroklorid pufferben (7,5 pH) 15 percig 37C°-on inkubáltuk. Ezután 0,5 g Dowex 2—X8 anioncserélő gyanta hozzáadásával az enzimreakciót megszüntettük, a szcintillációs folyadékot (Triton X-100 és toluol 1:2 arányú elegyében 0,5% koncentrációban 2,5-difeniloxazolt tartalmazó oldat 10 ml-e) hozzáadtunk, és a trícium (3H) által előidézett szcintilláció számlálásával mértük a 3 H-adenozint. A meghatározást az I általános képletű vegyületek különféle koncentrációival megismételtük, és az új vegyületek nélkül kapott eredményekkel összehasonlítottuk. Az új vegyületek például 5 x 10"6 — 5 x 10"3 mól koncentrációban 50%-kal gátolták a foszfodiészteráz által okozott hidrolízist. A találmány szerint előállítható vegyületek közül azok az I általános képletű 8-azapurin- 6-on-származékok és farmakológiailag elfogadható savaddíciós sóik előnyösek, melyek képletében R naftilcsoportot vagy egy, két vagy három szubsztituenst, éspedig fluor-, klór- vagy brómatomot vagy hidroxi-, alkil-, 10 fenilalkíl-, alkoxi-, alkeniloxi-, alkoxialkil-, fenoxi-, alkoxifenoxi-, fenilalkoxi-, alkiltio-, nitro-, alkánszulfonil-, amino-, dialküamino-, trifluormetil- vagy metíléndioxi-csoportot hordó fenilcsoportot, ciklohexil-5 csoportot, 2—6 szénatomos egyenes vagy elágazó alkilcsoportot vagy egy vagy két 1—4 szénatomos alkoxi-, ciklohexil- vagy fenilcsoporttal szubsztituált alkilcsoportot jelent. E vegyületek közül kiemelkedő jelentőségük van a XXVII általános képletű 10 8-azapurin-6-on-származékoknak és farmakológiailag elfogadható sóiknak — ebben a képletben R8 hidroxi-, 1—6 szénatomos alkoxi-, 2—4 szénatomos alkeniloxi- vagy fenil-{l—4 szénatomos)-alkoxi-csoportot, előnyösen benziloxicsoportot, 15 R9 fluor-, klór- vagy brómatomot vagy trifluormetil-, hidroxi- vagy nitrocsoportot vagy 1-4 szénatomos alkil- vagy 1-4 szénatomos alkoxicsoportot vagy fenil-(l—4 szénatomos)-alkoxi-, előnyösen benziloxicsoportot jelent, és 20 m értéke 0, 1 vagy 2, és ha m értéke 2, akkor az Rs által képviselt atomok vagy csoportok azonosak vagy különbözők lehetnek. A XXVII általános képletű vegyületek közül a legfontosabbak a következők: 8-aza-2-(2- hidroxifenil)-25 purin-6-on, 8-aza-2-(2-etoxifenil)-purin-6-on, 8-aza-2-(2-izopropoxifenil)- purin-6-on, 8-aza-2-(2-n-butoxifenil)- purin-6-on, 8-aza-2-(2-szek-butoxifenil)-purin-6-on, 8-aza-2-(2-izobutoxifenil)-purin-6-on, 8-aza-2-(2-n-pentiloxifenil)-purin-6-on, 8-aza-2-(2-izopentil-30 oxifenil) -purin-6-on, 8-aza-2-(5-terc-butil-2-metoxifenil)-purin-6-on, 8-aza-2-(2-n-hexiloxifenil)-purin-6-on, 8-aza-2-(2-benziloxifenil)-purin-6-on, 8-aza-2-(5- hidroxi-2-metoxifenil)-purin-6-on, 8-aza-2-(2,4-dimetoxifenil)-purin-6-on, 8-aza-2-(2,5-dimetoxi-35 fenil)-purin-6-on, 8-aza-2-(2,5-dibenziloxifenil)-purin-6 -on, 8-aza-2-(5-benziloxi-2-metoxifenil)-purin-6-on, 8 -aza-2-(2,5-dihidrofenil)-purin-6-on, 8-aza-2-(2-metoxi -5-metilfenil)-purin-6-on, 8-aza-2-(2-metoxi-5-nitrofenil)-purin-6-on, 8-aza-2-(2-metoxi-3,5-dinitro-40 fenil)-purin-6-on, 8-aza-2-(2-metoxi-5-trifluormetilfenil)-purin- 6-on, 8-aza-2-(2-metoxi-3,5-dimetilfenil)purin-6-on, 8-aza-2-(2-alliloxifenil)-purin-6-on, és különösen a 8-aza-2-(2-metoxifenil)-purin-6-on és a 8-aza-2-(2-propoxifenil)-purin-6-on és ezek farma-45 kológiailag elfogadható sói. A találmány szerinti egyéb fontos vegyületek a 8-aza-2-fenilpurin-6-on, 8-aza-2-( 3- n-hexiloxifenil)purin-6-on, 8-aza-2-(3-trifluormetilfenil)-purin-6-on, 8-aza-2-(3-metilfenil)-purin-6-on és farmakológiailag 50 elfogadható sóik. A következő példák a 8-aza-purin-6-on-származékok találmány szerinti előállítását szemléltetik. A hőmérsékleti adatokat Celsius-fokban adjuk meg. 55 1. példa 50 ml víz és 50 ml tömény sósav elegyét 0°-on tartjuk, és keverés közben 1,5 g nátriumnitritet adunk hozzá. A keletkezett oldatot továbbra is 0°-on tart-60 juk, és keverés közben 30 perc alatt 2,54 g 4,5-di-5
