165003. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2,4,6-trisz (terc-alkilamino vagy 1-adamantilamino) -S-triazinok előállítására
3 165003 4 amid vagy 1-adamantil-ciánamid 1 móljára számítva 0,5—2,0 mól mennyiségben alkalmazzuk, az elegyhez azonban ennél kisebb vagy nagyobb mennyiségű katalizátort is adhatunk. Hidroxfl-csoportot nem tartalmazó közömbös szerves oldószerként például benzolt, toluolt, xilolt, o-diklór-benzolt, dimetilformamidot vagy hasonló anyagokat alkalmazhatunk. A reakció végrehajtása során a reagenseket 15—35 C° hőmérsékleten elegyítjük egymással, majd az elegyet 15 perc -12 óra időtartamig 75—200 C"-on tartjuk. A képződött terméket elkülönítjük a reakcióelegyből, és önmagában ismert módon tisztítjuk. A találmány szerinti eljárással előállított 2,4,6-trisz-(tercier-alküamino- vagy l-adamantilamino)-s -triazinok Mycobacterium tuberculosis H37Rv fertőzés -ellenes hatást fejtenek ki. A vegyületek hatásosságát egéren vizsgáltuk a következő módszerrel: 4—6 hetes, 17—22 g súlyú Carworth Farms CF1 fehér nőstény egereket Mycobacterium tuberculosis H37Rv-vel fertőztünk meg. Pufferolt sóoldatban körülbelül 1,5 mg (nedves súly)/ml mennyiségű 12—14 napos, Sauton agar táptalajon tenyésztett mikroorganizmus-tenyészetet szuszpendáltunk, és az állatoknak intravénás úton 0,2 ml szuszpenziót adtunk be. Rendszerint 200—300 egeret fertőztünk meg, majd az állatokat véletlenszerűen ötös, illetve tizes csoportokba osztottuk. A kontroli-vizsgálatokhoz négy , egyenként öt egérből álló csoportot használtunk fel, míg a fennmaradó egereket a vizsgálandó hatóanyagokkal kezeltük. Egy évig tartó kísérletsorozat adatai alapján megállapítottuk, hogy a fenti módon megfertőzött 760 kezeletlen egér közül 756 elpusztul a 28 napos vizsgálati idő alatt, azaz a pusztulási arány 99,5%. A vizsgákadó vegyületet orálisan adtuk be a megfertőzött egereknek úgy, hogy az állatok táplálékához mért mennyiségű hatóanyagot kevertünk. Az állatok 14 napon át hatóanyagot tartalmazó, majd hatóanyagmentes táplálékot kaptak. A kontroli-csoportba tartozó állatok táplálékához nem adtunk hatóanyagot. Az állatok tetszés szerinti mennyiségű táplálékot fogyaszthattak. A vizsgálatot a megfertőzés után 28 nappal fejeztük be. A vegyületeket akkor tekintettük hatásosnak, ha egy-egy csoportban öt állat közül legalább kettőnél megszüntették a fertőzést, vagy ha az állatok átlagos élettartamát legalább négy nappal meghosszabbították a kontroli-csoporthoz viszonyítva. A vizsgálatok során az állatoknak kereskedelemben kapható, laboratóriumi egerek és patkányok számára készített táplálékot adtunk, amely a következő komponensekből állt: állati májliszt, halliszt, szárított savó, kukorica- és búzapehely, őrölt sárga kukorica, őrölt zabdara, hántolt szójabab-liszt, búzacsíra-liszt, búzadara, nádcukor-melasz, vízmentesített lucernaliszt, szójabab-olaj, szárított sörélesztő, sugárkezelt szárított élesztő (D2 vitamin forrás), riboflavin, nikotinsav, kalcium-pantotenát, klorálklorid, A vitamin-palmitát, állati szterin (D-vitamin-forrás) a-tokoferol- dikalcium-foszfát, tiamin-hidroklorid, menadion-nátrium-biszulfit (K-vitamin-forrás), só, nyomelemek (mangánoxid, rézszulfát, vaskarbonát, káliumjodát, kobaltszulfát és cinkoxid). Ez a kereskedelemben kapható tápanyag garantáltan legalább 24,0% nyers fehérjét, legalább 4,0% nyers zsiradékot és legföljebb 4,5% nyers rostanyagot 10 tartalmaz. A táplálékot az Allied Mills Inc. cég (Chicago, Illinois) Wayne Lab-BloxR néven hozza forgalomba. A korábban ismertetett vizsgálatok során a standard tápanyag és a hatóanyag homogén keverékét adtuk a megfertőzött kísérleti állatoknak, míg a kontroli-csoportba tartozó állatoknak hatóanyagmentes standard táplálékot adtunk. A következő táblázatban példaként felsorolunk néhány vegyületet, amely a táblázatban megadott dózisban hatásosnak bizonyult. Táblázat 15 Hatóanyag Táplálék hatóanyagtartama % Megfertőzés után 28 nappal még élő állatok/ összes állat 2,4,6-trisz 0,4 20 (1-adamantil-emino) 0,1 -s-triazin 0,025 0,006 2,4,6-trisz 0,1 25 (terc-butil-amino) 0,05 -s-triazin 2,4,6-trisz 0,4 (terc-pentil-amino) 0,1 -s-triazin 0.2 30 0,05 5/5 5/5 5/5 2/5 5/5 5/5 5/5 4/5 5/5 5/5 35 Megjegyzés: Mind a 100 megfertőzött, kezeletlen elpusztult. Átlagos élettartam: 19 nap. egér A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör 40 korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. 45 50 55 60 65 1. példa 2,4,6- Trisz(2,3,3-trimetil-2- butilamino)- s-triazin előállítása 7,0 g (0,05 mól) 2,3,3-trimetil- 2-butil-ciánamid 56 ml toluollal készített oldatába keverés és hűtés közben körülbelül 10 percig sósavgázt buborékoltatunk. Ezután az oldatot 2 órán át visszafolyatás közben forraljuk, majd szobahőmérsékletre hűtjük, szűrjük, és a szűrletet térfogatának felére bepároljuk. 2,16 g 2,4,6-trisz(2,3,3-trimetil- 2-butil-amino)s-triazin- hidrokloridot kapunk, amely 246-248 C°-on olvad bomlás közben. A terméket infravörös spektrum alapján azonosítottuk, a hiteles minta infravörös spektrumával összehasonlítva. A szűrletet szárazra pároljuk, a maradékot éterrel mossuk, majd acetonban oldjuk. Az acetonos oldatot szűrjük, és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot 3 ml metanolban oldjuk, és az oldathoz 1 ml 28%-os ammóniumhidroxid-oldatot adunk. A kivált 2,4,6-trisz(2ß,3-trimetil-2-butilamino)- s-triazint leszűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. 0,36 g terméket kapunk: így az összhozam: 46%.
