164997. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(D-alfa-amino-alfa -fenil-acetilamino)-3-metil-CEF-3-ÉM-4-karbonsav enzimes előállítására

3 164997 4 1. A baktériumsejtek alakja és mérete: 0,5-0,8 x 2,0 - 2,5 (x méretű, kerek szélű, rövid pálcikák. 2. Sejtek fejlődése: csaknem egyedül álló sejtek, láncok kevéssé alakulnak ki, és hártyájuk nincs. 3. Mozgékonyságuk nincs. 4. Spórájuk nincs. 5. Gram-festődés negatív. 6. Savállóság negatív. (b)Növekedés különféle táptalajokon: 1. Húslé-agar lemezen 30 C -on 24 óra alatt: jó növekedés, kidomborodó, nem széledő, fehér vagy halványsárga, fényes, puha, nedves, félig átlátszó telep, a táptalaj színe nem változik. 2. Ferde húslé-agaron (30 C°-on 24 óra alatt): jó növekedés, tejfehér, félig átlátszó, fényes, sima felületű, nedves, nem széledő telep, a táptalaj színe nem változik. 3. Folyékony húslé (30 C°-on 2 nap alatt): jó növekedés, egyenletesen zavaros, csapadék nincs, hártya nem képződik, pigment nincs. 4. Húslé-zselatin szúrt tenyészet: felületen és a szúrás vonalán fél mélységig növekedés,: a zselatin nem fofyósodik el. 5. Ferde szójabab-agar (30 C -on 24 óra alatt): jó növekedés, sima és lágy felületű, félig átlátszó, fehér vagy halványsárga telep, a táptalaj színe nem változik. 6. Burgonya-agar (30 C°-on 5 nap alatt): jó növekedés, sima és lágy felületű, kidomborodó, tejfehér telepek, a táptalaj színe nem változik. 7. Lakmusztej: savas, peptonizál. (c)Fiziológiai tulajdonságok: 1. Nitrátredukció: negatív 2. Denitráló reakció: negatív. 3. Metilvörös-próba: negatív. 4. Voges-Proskauer-próba: negatív. 5. Indoiképzödés: csekély. 6. Kénhidrogén-képződés: pozitív. 7. Keményítőhidrolízis: pozitív. 8. Citráthasznosítás: erősen pozitív. 9. Szervetlen nitrogénforrás hasznosítása: nitrátot és ammóniumsót hasznosít. 10. Pigmenttermelés: nincs. 11. Ureáz: gyengén pozitív. 12. Oxidáz: pozitív. 13. Kataláz: pozitív. 14. Növekedési határok: 5—9 pH-nál növekszik; legkedvezőbb pH: 7—8 7—40 C°-on növekszik; legkedvezőbb hőmérséklet: 24—30 C°. 15. Aerob. 16. O-F próba: O-típusú. 17. Szénhidrátok fermentálása: Savképződés Gázfejlődés L-arabinóz _ _ D-xilóz -D-glükóz D-mannóz • _ D-fruktóz _ _ D-galaktoz - _ ma It óz _ _ szacharóz — _ laktóz trehalóz — _ D-szorbrt _ _ inozit _ _ Savképződés Gázfaj lődés glicerin — _ keményítő — _ ramnóz — _ 5 ribóz — _ celobióz — _ raffinóz — _ melecitóz — _ inulin — _ in szaiicin — _ glucin — _ Bergey: „Manual of Determinative Bacteriology" c. könyve 7. kiadása nyomán a B-402-2 törzset e 15 tulajdonságok alapján az Achromobacter fajhoz tartozónak ítéltük, mivel az agart nem bontja, pigmentet nem termel, és lakmusztejen savas. Ezenkívül az Achromobacter parvulushoz hasonlít, mert nem mozgékony, és glükózból nem termel savat. 20 Az Achromobacter parvulustól azonban a következőkben különbözik: B—402—2 törzs Achromobacter parvulus *••> Indoiképzödés csekély nincs keményítőhidrolízis pozitív negatív nitrátredukció negatív pozitív 30 Következésképpen a B-402-2 törzs az Achromobacter parvulustól különböző fajnak tekintendő, és ezért Achromobacter B-402-2 új fajnak nevezzük. A törzset deponáltuk az Institute for Microbiological 35 Industry and Technology (Japan), Agency of Industrial Science and Technology törzsgyűjteményébe. Állandó deponálási száma: FERM-P 1095. A törzset a U.S. Department of Agriculture, Agricultural Research Service (Peoria) törzsgyűjteményébe is 40 deponáltuk NRRL-B-5393 számon. A találmány értelmében cefalexin előállítására például még a következő mikroorganizmusok is használhatók. Alcaligenes faecalis ATCC 8750, 45 Achromobacter aceris IFO 3320 (NRRL B-5391), Achromobacter liquidum IFO 3084 (NRR' B-5392), Flavobacterium aquatile IFO 3772 (NRRL B-5394), 50 Flavobacterium capsulatum IFO 12533 (ATCC 14666), Beneckea hiperoptica ATCC 15803. A felsorolt mikroorganizmus törzsek vagy a belőlük nyert enzimkészítmények a cefalexinre 55 specifikus hatást gyakorolnak, és képesek 7—ADCA-ból és D-fenilglicinből csaknem kvantitatíve cefalexint termelni. Az alkalmazott körülményektől függően az említett enzimkészítmények a cefalexin amidkötését 60 felszakítják 7-ADCA termelésével, de a D-fenilacetamido-dezacetoxicefaloszporánsavra csaknem semmi hatást nem gyakorolnak. Eddig még nem volt ismeretes olyan acilező enzim, amely a 7—ADCA-ban levő aminocsoportot szelektíven acileztve volna. 65 A találmány szerinti eljárásban használt 7-ADCA ismert eljárások szerint állítható elő: ilyenek például a cefaloszporin C-ből való előállítás (3 124 576 számú 2