164992. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a DHA- és a DHP-vegyület acilezett származékainak előállítására
3 164992 4 acilezése útján. A reakcióhőmérséklet előnyösen 0°C és 10 °C között van. Savmegkötőanvagként célszerűen piridint, trietil-amint. piperidint, kinolint, káliumkarbonátot, nátrium-acetátot, natriuni-propionaiui vagy nátrium-hidrogén-karbonátot használunk Rövidszénláncú alifás karbonsavhalogenidként vagy karbonsavanhidridként előnyösen például acetil-kionüoi, ace tii-biomidot, propionil-kloridot, butiril-kloridot, propionil-bromidot, ecetsavanhidridet. propionsavanhidridet vagy vajsavhidridet használunk. A reagáltatást vízmentes körülmények között foganatosítjuk. Ezért oldószerként előnyösen vízmentes acetont használunk. A fentiekben ismertetett körülmények között a (II) általános képletű vegyületek 9-helyzetű szelektív acilezése 0,5-7 óra alatt végbemegy. Ha a reagáltatást hosszabb időn át, azaz 1-20 órán át folytatjuk, akkor a (II) általános képletű vegyületek 9,2-di-0- (rövidszénláncú alifás)- acilszármazékait kapjuk. Másrészt a (II) általános képletű vegyületek 2'-0-(rövidszénláncú alifás) acil-származékai előállíthatók, ha a (II) általános képletű vegyületet rövidszénláncú alifás karbonsavanhidriddel savmea kötőszer nélkül vízmentes közegben acilezzük. A reakcióhőmérséklet ez esetben előnyösen U t es ID C között van. Alifás karbonsavanhidridként előnyösen ecetsavanhidridet, propionsavanhidridet vagy vajsavanhidridet használunk. Oldószerként célszerűnek bizonyul vízmentes aceton használata A ül) általános képletű vegyület szelektív acileződése a 2'-helyzetben 2-6 órán át tart. Ha a reagáltatást szobahőmérsékleten, azaz 5°C és 30°C között további 10-24 órán át folytatjuk, úgy a (II) általános képletű vegyület 9,2'-di- 0-(rövidszénláncú alifás) acil-származéka képződik. A fentiekben ismertetett szelektív acüezés foganatosítása során ügyelni kell arra, hogy ne következődjék be a (II) általános képletű vegyület 4"-helyzetű acileződése a 9- és a 2'-helyzetű acüeződést követően. E célból a reakció során a (II) általános képletű vegyület acileződését vékonyréteg-kromatográfiás úton követni szükséges. A DHP- vagy a DHA-vegyület fenti módon előállított 9- és'vagv ?'-0 Crövidszénláncú alifás) acil-száranazékai közti termékekként hasznosíthatók télszintetikus makrolid antibiotikumok, így például a 9,2'-0- diacetil-4'íO-fenil-aretit- DHP-vegviilet 9.2" -0-diacetil-4" -0-(3-fenil-propionil)- DHP-vegyület 9.2'-0- diacetil-4"-0-[3-(2-tunl>-akriioii|- Ulli' vetület vagy a 9.2''-0- diacetil-4"-0- cinnamoil-DH A -vegyület előállításánál. Az említett félszintetikus makrolid antibiotikumok hatékonyan gátolják a mikroorganizmusok így például a Gram-pozitív baktériumok növekedését. Továbbá az említett vegyületek az (1) általános képletű köztitermékekből hagyományos módon végzett acüezés útján állíthatók elő. A továbbiakban a „rövidszénláncú alifás acil-csoport" kifejezés alatt 2-4 szénatomot tartalmazó alifás karbonsavakból leszármaztatható acil-csoportokat értünk. A példákban használt DHA-vegyületet az alábbi módon állítjuk elő. 1,5 % keményítőt, 1,0% glükózt, 0M szójabablisztet, 0,1% sikér-tápanyagot,0,5% nátrium-kloridot, 0,2% kalcium-karbonátot, 0,05% szekunder-káhum-foszfátot és 0.06% cink-szulfát-heptahidrátot tartalmazó vizes táptalajból 15 litert fermentorba töltünk. A táptalaj pH értékét ezután 7,0-ra beállítjuk, és a táptalajt 12U C-on sterilizáljuk. Ezt követően a fermentort beoltjuk a Streptomyces platensis var. sp. NRRL 3761 (75 0572 számú belga szabadalmi leírás) e, megnevezésű mikroorganizmus tenyészetével, és a táptalajt 72 órán át keverés és levegőztetés közben 27°C-on tartjuk. Ezután a fermentáló közeg 10 literjét szűrjük, a kapott szűrlet pH értékét 8,0-ra beállítjuk és kétszer 30 liter etil-acetáttal extraháljuk, ]C maid az extraktumot 5 literre bepároljuk. A betöményített extraktum pH értékét 5,0-ra beállítjuk es kétszer 2 liter savas vízzel extraháljuk. A kapott vizes extraktum pH értékét 8.0-ra beállítjuk, és kétszer 2 liter benzollal extraháljuk. A benzolos 15 extraktumot 100 ml-re betöményítjük. A betöményített benzolos extraktumhoz 100 ml n-hexánt adunk, majd a képződött csapadékot szűrés útján elkülönítjük és megszárítjuk. Az így kapott 2 grammnyi fehér port kromatográfiásan tisztítjuk 3 cm átmérőjű és 40 2d cm magas oszlopba töltött 100 g szilikagélen eluálószerként benzol és aceton elegyét használva, es 20 ml-es frakciókat elkülönítve. Az eluálószer aceton-tartalmát az 1-30. frakciókban 30%-ra, a 31-60. frakciókban 40%-ra, a 61-90. frakciókban 25 50%-ra, míg a 91-120 frakciókban 60%-ra állítjuk be. Az eluátum 98-105. frakcióit egyesítjük és bepároljuk, amikoris 120 mg DHA-vegvületet kapunk A termék olvadáspontja 120-124°C. vékonyréteg-kromatográfiás Rf-értéke 0,40 (alumínium-oxid hordozó. 30 benzol és aceton 1:1 arányú elegye mint futtatószer.). A DHA-vegyület ultraibolya spektruma: 3í E í!2 233 nvi dog = 4,47) A DHA-vegyület infravörös spektruma: 3460, 2910, 2720, 1728, 1624. 1446. 1408, 1368, 1288.1218.1154.1112. 1072.1045,1010,987. A találmányt közelebbről az alábbi példákkal világítjuk meg. 4! /. példa 5 ml acetonban feloldunk I g DHP-vegyületet. Az b( acetonos oldathoz jeges hűtés és keverés közben ü 4 ml ecetsavanhidridet adunk, majd a kapott oldatol 10°('-on 10 órán át keverjük. Ezt követően az oldatoi 20 ml vízbe ontjuk, és a vizes elegy pH-értékét nátrium-hidroxiddal 7.^-re beállítjuk Ezután a/ 5- elegyet kétszer 10 ml etil-acetáttal extraháljuk, mad a kapott extraktumot szárazra pároljuk A bepárolási maradékot n-hexan és etil-acetái elegyéből átkristályositjuk. Így 0.7 g 2'-0-acetil-DHP- vegyületet kapunk fehér por alakjában fii A termék azonosítási adatai: Olvadáspont 118-120C C; molekulasúly 799 (tömeg spektrometriásan meghatározva.) Ultraibolya, abszorpciós spektrum: : 232 mu (logt =4.32) 2
