164988. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új atibiotikum előállítására
17 164988 18 kapunk. A port kis mennyiségű etüacetátban oldjuk és petrolétert adunk hozzá, maid hűvös helven állni hagyjuk. A termék 3 g kristályos port ad. A kristályos por 0,062 - 0,125 mcg/nü minunaüi» gatlo Koncentrációt mutat Trichomonas vaginalis No. 4F ellen. 5. példa A 4. példával azonos módon kapott fermentlé kb. io 90 literéhez Hvflo Supercel-t adunk, és szűrjük. A szűrlet 70 literéhez híg sósavat adunk, az oldatot 2-es pH-re való beállítás után, először 20 liter etilacetáttal, majd 15 liter etilacetáttal extraháljuk. Másrészt a Hyflo Supercelt tartalmazó micélium- 15 hoz 5 liter vizet és híg sósavat adunk, majd az oldatot 2-es pH-ra való beállítás után 20 liter etilacetáttal, majd 15 liter etilacetáttal extraháljuk. Valamennyi fenti extraktumot egyesítjük és először 30 liter híg vizes ammóniaoldattal, majd 30 20 liter vízzel mossuk, ezután csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékhoz n-hexánt adunk és hűvös helyen tartjuk. A kapott csapadékot kinyerve 60 g nyers port kapunk, amelynek a Trichomonas vaginalis No. 4F-el szemben mutatott minimális gátló 25 koncentrációja 0,125 mcg/ml. 6. példa •0 A 4. példáéval azonos módon kapott fermentlé kb. 90 literéhez Hyflo Supercel-t és híg sósavat adunk. A keveréket 2-es pH-ra állítjuk be és 70 Üter etilacetáttal elegyítjük, majd 1 órán át keverjük A kapott terméket leszűrjük, a szűrlet etilacetátos >5 lazisat elválasztjuk. 20 liter híg ammoniaolüattai es 20 liter vízzel mossuk, majd az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk. A maradékhoz n-hexánt adunk és hűvös helyen tartjuk. A kapott csapadékot kinyerjük és 50 g nyers U) port kapunk, melynek minimális gátló koncentrációja 0.125 mcg/ml Trichomonas vaginalis No. 4F-el szemben. 7. példa A 4. példával azonos módon kapott fermentlé 90 literéhez Hytlo Supercel-t és híg kénsavat adunk. Az ){J elegyet 4-es pH-ra állítjuk be, 30 percig keverjük és leszűrjük. Az ilymódon kapott, Hyflo Supercel-t tartalma/''' micélium 20 literéhez '"O liter 1 súlyzós oxálsavat tartalmazó etilacetátot adunk,az elegyet 1 órán át keverjük es leszúrjuk. A szürletet 20 üter liig vizes . ammóniaoldattal és 20 liter vizzel mossuk, majd csökkentett nyomáson betöményítjük. A maradékhoz n-hexánt adunk ét hűvös helyen tartjuk. A kapott csapadékot kinyerjük és így 70 g nyers port kapunk, mely trichomonas vaginalis No. 4F-el szemben 0,125 ,-JQ mcg/ml minimális gátló koncentrációt mutat. 8. példa A 4. példában kapott nyers por 10 g-ját csekély mennyiségű n-hexán és metanol 5:2 arányú elegyéből álló oldószer alsó fázisban oldjuk. Az oldatot a fenti arányú oldószer felső fázisnak azonos mennyiségével háromszor átmossuk. Az ilymódon kezelt alsó fázist csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, így 9 g kristályos port kapunk. A kristályos porhoz metanolt adunk és ezzel összekeverjük, így3 g nyers kristályt kapunk. Ez a kristály a Trichomonas vaginalis No. 4F-el szemben 0,062 mcg/ml minimális gátló koncentrációt mutat. 9. példa A 3. példában kapott kristályos pot 1 g-ját 25 ml 20:1 arányú kloroform-metanol elegyben oldjuk es az oldhatatlan részeket eltávolítjuk. Az oldatot mintaoldatként használjuk. Másrészt, 100 g szilikagélt (Merck és Co., NSZK gyártmány, 70-325 mesh átmérő) 200 ml 1 súly% oxálsavat tartalmazó etilacetátban szuszpendáljuk, majd keverjük és leszűrjük. A kapott terméket etilacetáttal jól kimossuk és szobahőmérsékleten szárítjuk. Az ilymódon impregnált szilikagélt egy oszlopba töltjük és az oszlop kromatográfiához kloroformot használunk. A fenti mintaoldatot az oszlopra ráfolyatjuk és az eluálást az oldószer folyamatos átfolyatásával végezzük, az oldószer először kloroform, majd kloroform és metanol 9:1 arányú elegye és az eluálás ideje alatt a metanol mennyisége folytonosan nő. Az eluátumban, a Trichomonas vaginalis és a Bacillus subtilial szemben nagy aktivitást mutató frakciókat összegyűjtjük, vizzel mossuk szárítjuk és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot kloroform és metanol elegyéből átkristályosítjuk, így 0,5 g kristályos T-24-146-t kapunk, mely a következő tulajdonságokat mutatja: Olvadáspont: 168-173°C (bomlik) Elemi analízis: C, 71, 16, 72, 68;H,6,41 6,93; N, 2,38, 2,67; O, 17,11,17,61. Molekulasúly: a) vízgőznyomásos ozmózis módszerrel, etüacetátban mérve: 535 ± 50; b) titrálásos módszerrel: kb. 550, dimetüszulfoxid és víz 7:2 arányú oldatában mérve. Specifikus forgatóképesség: [alff = +872 ± 80° (C=0,5 %) (kloroformban mérve). Ultraibolya abszorpciós spektrum: maximális abszorpció: \MeOH = -JQQ . elnyelés E 1^=1879 ±200. Infravörös abszorpciós spektrum: KBr-ben mérve. Az alapvetően jellegzetes abszorpciós sávok hullámszáma (cm*1 ) a következő: 3470, 334U, 3000, 291U, io50, 1610, 1510, 1450, 13»5, 1300, 1250, 1218, 1175, 1125, 1040, 987, 960. Oldékonyság: Könnyen oldható kloroformban és etüacetátban, Oldható metanolban, etanolban, acetonban, dietüéterben és benzolban; alig oldódik ill. oldhatatlan vízben, n-hexánban és petroleuméterben. 9
