164988. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új atibiotikum előállítására

15 164988 16 kukoricalekvár 1,0 súly% Pepton 0,5 súly% nátriumklorid 0,3 súly% vasklorid 0,05 súly% kalciumkarbonát 0,5 súly% (pH = 7,0) Az edényt 1,5 atmoszféra nyomáson 30 percig sterilizáljuk. Lehűlés után a táptalajt a Streptomyces viridochromogenes No. T-24—146 micélium szuszpenziójával - melyet előzőleg glukóz-aszparagin agáron i o 28 Con 8 napig tenyésztettünk - oltjuk be. Az ilymódon beoltott edényt 28°C-on 72 órán át indukáljuk 220 fordulatszámú rázókeverőgépet alkalmazva. A fermentlevet leszűrjük. Az így kapott szürlet teljesen megakadályozza a Trichomonas 1h vaginalis No. 4F növekedését, még 400 szoros hígításban is. 2. példa Egy 200 ml befogadóképességű tenyésztő edényt 40 ml inokulum táptalajjal toltunk meg. Az inokulum táptalaj összetétele: glukóz 2,0 súly% oldható keményítő 3,0 súly % szójababliszt 1,0 súly% kukoricalekvár 1,0 súly% pepton 0,5 súly% nátriumklorid 0,3 súly% kalciumkarbonát 0,5 súly% Az edényt 1,5 atmoszféra nyomáson 15 percig sterilizáljuk. Lehűlés után, a táptalajt, a Streptomyces viridochromogenes No. T—24—146 micéliumszuszpenziójával oltjuk be. melvet előzőleg glukózaszparagin agáron 28 °C-on 8 napig tenyésztettünk. Az ilymódon beoltott edényt az 1. példával azonos módon 28°C-on, 48 órán keresztül inkubáljuk. A . főtáptalajt 2,5 %-os inokulum-mennyiséggel oltjuk be. A fntáptalai az alábbi összetétellel bír, és ezt előzőleg egy 200 ml befogadóképességű tenyésztő edényben sterilizáltuk. glukóz 2,0 súly % glicerin 1,0 súly% oldható keményítő 2,0 súly% szójabab liszt 1,0 súly% kukoricalekvár 1,0 súly% gyapotmagliszt 1,0 súly% >o pepton 0,5 súly% nátriumklorid 0,3 súly% kalciumkarbonát 0,5 súly% (pH = 7,0) A beoltott edényt 28,C-on, 120 órán át .: inkubáljuk 220 fordulatszámú rotációs rázógépet alkalmazva. A fermentlevet ezután leszűrjük. A szürlet teljesen megakadályozza a Trichomonas vaginalis No. 4F növekedését, még 800—1000-szeres hígításban is. -su 3. példa Egy 2000 ml befogadóképességű tenyésztő edénvt 500 ml a 2. példával azonos inokulum táptalajjal megtoltunk, és 1,5 atmoszféra nyomáson 15 percig sterilizáljuk. Lehűlés után a táptalajt Streptomyces viridochromoges No. T-24-146-törzzsel beoltjuk és a tenyészetet reciprok rázógépen 28°C-on, 48 órán át inkubáljuk. Az ilymódon kapott inokulummal 30 liter, a 2. példával azonos összetételű főtáptalajt tartalmazó 50 Uteres fermentorba oltunk be, 1,5% inokulumot alkalmazva. Az ilymódon beoltott fermentort 28°C-on 90 órán át üzemeltetjük 280 fordulatszámú keverőt alkalmazva és 100^/perc levegőztetés közben. A fermentléhez Hyflo Supercelt (Johns-Manviíle, USA) adunk, majd leszúrjuk. Az így kapott szürlet 20 literéhez híg sósavat adunk úgy, hogy a pH érték 4 legyen. A szürletet ezután először 10 liter etiíacetáttal, majd ismét 5 liter etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos fázisokat egyesítjük és először 3 liter, majd 2 liter 2 súly%-os nátriumhidrogénkarbonát oldattal, ezt követően pedig 5 liter vízzel mossuk, majd vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. Az ilymódon kapott száraz etilacetátos oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk, és a maradékhoz petrolétert adunk, majd a keveréket leszűrjük. Ez a termék 4 g nyers port ad. A port kis mennyiségű kloroform és metanol 20:1 arányú elegyében oldjuk, és az oldhatatlan részeket szűréssel eltávolítjuk s szürlethez metanolt adunk, ezáltal 1 g kristályos poralakú I -24-146 -hoz jutunk. Ennek a kristályos pornak minimális gátló koncentrációja Trichomonas vaginalis No. 4F-el szemben 0,062 - 0,125 mcg/ml. 4. példa A 2. példával azonos inokulum táptalajt használva az említett példával azonos körülmények között kapott inokulummal 30 liter főtáptalajt tartalmazó 50 literes fermentort oltunk be, 1,5%-os inokulum mennyiséggel. A főtáptalaj az alábbi összetétellel bír: glukóz 2,0 súly% oldható keményítő 3.0 súly% szójababliszt 1,0 súly% kukoricalekvár 1,0 súly% pepton 0,5 súly% nátrium-klorid 0.3 súly% kalciumkarbonát 0,5 súly% (pH = 7.0) A ferntentort 28 °C-on 24 órán át üzemeltetjük 280 torduiatszainu keverést alkalmazva 100 %/perc levegőztetés közben. A kapott inokulum 10 literével a 2. példáéval azonos táptalaj 100 literét tartalmazó 200 literes fermentort oltunk be. A fermentort 28 °C-on 90 órán át 200 fordulatszámú keverést alkalmazva, 100 %/perc levegőztetés mellett üzemeltetjük. A fermentléhez Hyflo Supercel-t adunk, majd leszűrjük. A kapott szürlet 70 literéhez híg sósavat adva, a pH-értéket 4-re állítjuk. A terméket 20 liter etilacetáttal, majd ismét 15 liter etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos fázisokat egyesítjük és kétszer 10-10 liter vizzel mossuk és csökkentett nyomáson kb. 2 literre töményítj ük be. A betöményített folyadékot először 1000 ml 5 súly%-os nátriumhidrogénkarbonát oldattal, majd ismét 500 ml 5 súly%-os nátriumhidrogénkarbonát oldattal és vizzel mossuk, ezután vízmentes natiiumszulfát oldat felett szárítjuk. Az etilacetát elpárologtatása után a maradékot petroléterrel mossuk, ilymódon 10 g nyers port 8