164986. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új acth-jellegű polipeptidek előállítására

7 164986 8 4. táblázat folytatása BOC I Val-Lys -Val-Tyr- NH2 C H )-N=C=N-( H > OtBu H® Cl0

BOC I I I BOC-Sar-Tyr- Ser-Met-Glu -His-Phe- Arg-Try-Gly-Lys Prö-Val-Cl© C1

0 BOC BOC H© H© BOC llll I -Gly-Lys -Lys -Arg-Arg- -Pro-Val-Lys -Val-Tyr- NH

2 4- CF3COOH H-Sar- Tyr-Ser-Met-Glu- His-Phe-Arg- Try-Gly-Lys-Pro-Val- Gly- Lys-Lys-Arg-Arg- Pro-Val- Lys-Val- Tyr-NH2 A fentiekben említett „megfelelő savaddiciós só" például egy szervetlen savaddiciós só, (például hidroklorid, szulfát, vagy hasonló), vagy egy szerves savaddiciós só (például acetát, formiát, stb.). A kondenzációs reakciót általában egy megfelelő oldószer jelenlétében végezzük. Az oldószer például dimetilformamid vagy dimetilszulfoxid, vízmentes vagy víztartalmú, vagy ezeknek kloroformos, dioxános, diklórmetános vagy tetrahidrofurános elegye lehet. A reakció hőmérséklete általában -20 és +30 C° között van, bár végezhető a reakció melegítéssel vagy hűtéssel is. A két, egymással amido-kötést létrehozó anyagot általában sztöchiometrikus mennyiségben használjuk, de a mennyiségek tetszés szerint változhatnak. Általában ha az N-terminális peptidfragment viszonylag rövid, jobb termelések és eredmények érhetők el, ha ezt a fragmentet feleslegben adagoljuk. A reakció befejeződése után a végtermékeket az önmagukban ismert általános módszerekkel izolálhatjuk. A reakciókörülményektől függően, ez az új vegyület bázisként vagy sóként keletkezik. A sóból a bázis a szokásos módszenei a bázissá alakitható, és a bázis egy gyógyászatilag alkalmazható savval reagáltatva a megfelelő sóvá alakítható át. Ilyen fentiekben említett sav például egy szervetlen sav, például valamilyen hidrogénhalogénsav, például sósav vagy hidrogénbromid, perklórsav, salétromsav, tiociánsav, kénsav vagy foszforsav, vagy egy szerves sav, például hangyasav, ecetsav, propionsav, glikolsav, tejsav, piruvinsav, oxálsav, maionsav, borostyánkősav, maleinsav, fumársav, antranilsav, fahéjsav, naftalinszulfonsav, vagy szulfanilsav. Az így keletkezett végterméket az önmagukban ismert eljárásokkal fémkomplexeivé alakíthatjuk át. Például ha egy, a fentiek szerint előállított vizes polipeptidoldatot réz, nikkel, kobalt és vas közül egynek vagy többnek sójával, hidroxidjával vagy oxidjával reagáltatunk, és a keletkezett elegy pH-ját 6 és 8 közé állítjuk, a hordozó fémvegyület és a fenti polipeptid között egy gyengén oldódó fémkomplex vegyület keletkezik. Az így előállított különböző fémkomplexek közül a cinkkomplex kiemelkedik nyújtott hatású aktivitása miatt. 5 A találmány szerinti eljárással előállított polipeptideket különböző gyógyászati alakban adagolhatjuk, melyek ezt alkalmas, gyógyászatilag használatos szerves vagy szervetlen összetevőkkel együtt tartalmazzák. Dyen alkalmas összetevők azok, melyek 10 a fenti polipeptiddel nem reagálnak, például a zselatin, hktóz, glükóz, nátriumklorid, keményítő, magnéziumsztearát, talkum, növényi olajok, benzilalkohol, gumi, polialkilénglikol, fehér vazelin, koleszterin, stb., valamint más hagyományos 15 gyógyszerhordozó. Az előbb említett gyógyászati alakok például a tabletta, cukorbevonatú tabletta, kenőcs, krém, kúp, oldat, szuszpenzió vagy emulzió alak. Az ilyen készítmények sterilizáltak lehetnek és/vagy segédanya-20 gokat, például konzerválószereket, stabüizálószereket, nedvesítő anyagokat, vagy emulgeálószereket tartalmazhatnak. Tartalmazhatnak a készítmények más, gyógyászatilag alkalmazható anyagokat is. A találmány szermti anyagot orálisan vagy 25 parenterálisan egyaránt adagolhatjuk, de előnyösebb terápiás eredményeket értünk el, ha az adrenokortikotróp hormon (ACTH) helyettesítőjeként parenterálisan, például intramuszkulárisan, intravénásán vagy hipodermálisan adagoltuk, injekcióként. A dózis 30 változó, a polipeptid esetében azonban naponta néhányszor körülbelül 0,01-1 mg az általános adagolás. Cinkkomplex vegyület esetén körülbelül 0,1-1 mg vegyületet adagolunk, naponta egyszer vagy kétszer. 35 A találmány szerinti eljárást az alábbi példák kapcsán részletesebben ismertetjük. A példák során a ..milligramm", „gramm" és „milliliter" elnevezéseket egyszerűen „mg", „g" és „ml" rövidítésekkel jelöljük. A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat eredménye-40 inéi használt jelölések: Ri: Rf-érték metilénklorid^netanol-ecetsav (9:1 w,5) rendszerben; R^: Rf-értéketilacetát-piridin-ecetsav-víz (60:20: 6:11) rendszerben; 45 R|: Rférték n-butanol- ecetsav-víz (4:1:1) rendszerben; és Rf: Rf -érték- n-butanol-piridin-ecetsav-víz (30:20: 6:24) rendszerben. 1. példa 55 (l)Z-Sar-Tyr-OCH3 400 ml acetonitrilben 28 g Tyr-OCH3

HCl-t szuszpendálunk, és jéghűtés közben 16,8 ml trietilamint adunk hozzá. 30 perc múlva a 60 reakcióelegyhez 22,4 g Z-Sar-OH vegyületet és 24,8 g diciklohexilkarbodümidet adagolunk. A rendszert jéghűtés közben két órán át keverjük. A reakcióelegyet egy éjszakán át hűtőszekrényben tartjuk, majd reggel 1-2 csepp ecetsavat adunk 65 hozzá. A keletkezett diciklohexilkarbamidot szűréssel eltávolítjuk, majd az acetonitrilt lepároljuk. A 4