164986. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új acth-jellegű polipeptidek előállítására
9 164986 10 maradékhoz 500 ml etilacetátot adunk, és az . oldhatatlan anyagot leszűrjük. A szűrletet 1 n sósavoldattal savanyítjuk, majd 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát- oldattal mossuk, és nátriumszulfát felett szárítjuk. Az etilacetátot ledesztilláljuk, 5 csökkentett nyomáson és a kristályos maradékot etanol-éter elegyből átkristályosítjuk. Termelés 28 g (70%), 041.: 155-157 C°, [a]2 ß. = +4,8° (c = 1,0, dimetilformamidban), Analízis a C2 iH 24 0 6 N 2 képlet alapján számított: C = 62,99%, H=6,04%. N = 7,00%; mért: C = 63,14%, H= 6,12%, N=6,85%. (2) Z£ar-Tyr-NH-NH2 100 ml metanol és 20 ml dimetilformamid elegyében 20 g Z-Sar-Tyr-OCH3 vegyületet oldunk, majd 12,5 ml hidrazinhidrátot adunk hozzá. A 20 rendszert 50 órán át állni hagyjuk, a keletkezett kristályokat szűréssel elválasztjuk, és 200 ml metanolban szuszpendáljuk. A szuszpenziót forraljuk, és lehűtés után a kristályokat leszűrjük. Termelés 18,8 e (94%), o.p. 221 C° (bomlás közben), 25 [<*]2 ]> = + 7 > 4 ° ( c = IÁ dimetilformamidban), Analízis a C2 oH 24 OsN 4 képlet alapján számított: C = 59,99%, H = 6,04%, N = 13,99%: mért: C = 59,86%, H = 6,08%, N = 13,96%. 30 (3) Z- Sar-Tyr-Ser- OCH3 8 g Z-Sar-Tyr-NH-NH2 vegyületet oldunk 80 ml dimetilformamid és 40 ml 2 n sósavoldat elegyében, majd az elegyet -10 C°-ra hűtjük. Ehhez 5 ml 5 n 35 nátriumnitritoldatot adunk, 5 perces keverés alatt, majd 200 ml jeges vizet öntünk hozzá. A kivált olajat etilacetáttal extraháljuk, és a szerves fázist 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonátoldattal és vízzel mossuk. A fenti azidoldathoz 3,12 gH-SerOCH3 HCl-t és 2,8 ml 40 trietilamint adunk, 50 ml etilacetátban oldva. A reakcióekgyet 3 (T hőmérsékleten keverjük, majd szárazra pároljuk, a maradékot éterben oldjuk, és ítilacetáttal mosva kapjuk a kívánt vegyületet, mely ! 59 C°-on olvad. 45 (4) Z-Sar -Tyr-Ser-NH-NH2 4,68 g Z-Sar-Tyr-Ser-OCH3 vegyületet oldunk 15 ml dimetilformamid és. 100 ml metanol elegyében, 5Q majd 2,5 ml hidrazinhidrátot adunk hozzá. A rendszert 70 órán át szobahőmérsékleten tartjuk, és a keletkezett, gélszerű csapadékot szűréssel elválasztjuk,, A csapadékot dimetilformamid-metanol elegyből hagyjuk újragélesedni. A gélt leszűrjük és szárítjuk. 55 Termelés 4,1 g (87,5%), o.p.: 215 C° (bomlás közben, 185 C°-nál zsugorodás), t"]2 r> 8 = + 4,4 (c = 1,0, dimetilformamidban), Anaüzis a C23 H 30 0 7 N s képlet alapján: számított: C = 56,54%, H = 6,19%, N = 14,33%, 6 0 mért: C = 55,14%, H = 6,03%, N = 14,44%. (5) OtBu Z-Sar-Tyr-Ser-Met-Ghi-His-Pro- Val NOj Z I I Phe-Arg -Try-Gly- Lys Z Z N02 N0 2 Z llll I -Gly-Lys -Lys-Arg-Arg -Pro-Val-Lys -Val-Tyr*ro4jH 7,5 ml í% tiogükolsavat tartalmazó trifluorecetsavat adunk 998 ml OtBu N02 15 10 BOC-Met-Glu-His-Phe-Arg -Try-Gly-Lys- Pro-VaKJty-Z Z I I Eys-Lys-NOj N02 Z I I I -Arg-Arg- Pro-Val-Lys- Val-Tyr- Pro-OH vegyülethez; (lásd a 3 651 039. sz. Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás szerinti peptidelőállítást). A pepiidet az elegyet 20 percig szobahőmérsékleten rázva oldjuk, melynek végén a trifluorecetsavnak körülbelül felét csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, a maradékhoz 50 ml étert adunk, és az így keletkezett színtelen csapadékot leszűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. A keletkezett port 9 ml dimetilformamidban oldjuk, és jéghűtés közben az oldatot 13 ml 10%-os dimetilformamidos trietilaminoldat hozzáadásával semlegesítjük. Ugyancsak oldunk 211 mg Z-Sar-Tyr-Ser- NH-NH2 vegyületet is 9 ml dimetilformamidban, és az oldathoz 0,3 ml 6 n sósavoldatot adunk. A rendszert -10 C°-ra hűtjük, és erős keverés mellett 0,15 ml 4 n vizes nátriumnitritoldatot csepegtetünk hozzá. 20 perc múlva a reakcióelegyet 2,55 ml 10%-os dimetilformamidos trietilaminoldattal semlegesítjük, és vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. Ezt az oldatot adjuk a fentiek alapján készített heneikozapeptidszármazék oldathoz -5 C° hőmérsékleten, és az elegyet 4 órán át -5 C°-on, majd 20 órán át 5 C°-on keverjük. A reakcióelegyhez 150 ml, 0,1% tioglikolsavtartalmú etilacetátot adunk, és a keletkezett csapadékot szűréssel elválasztjuk. Ezt a porszerű csapadékot etilacetát-piridin- ecetsav-víz tioglikolsav (60:20:6:11:0,1) elegyben oldjuk, és az oldatot 2x21 cm méretű szíikagéloszlopra visszük fel, majd az eluálást ugyanezzel a fenti oldószereleggyel végezzük. A 90. és 130. ml közötti frakciókat egyesítjük, és az etilacetátot vákuumban lepároljuk, majd a maradékhoz hideg vizet adunk. A keletkezett csapadékot elválasztjuk, és 0,1% tiogükolsavat tartalmazó 1%-os ecetsavoldattal, majd vízzel mossuk, végül szárítjuk. Termelés 582 mg (56%). O.p.: 190-194 C (bomlás közben, 156 C -on zsugorodás), [a]2fy 5 =' -32,4° (c = 1,0, dimetilformamidban), Anaüzis a Ci76 H 237 0 44 N 43 S. 6H 2 0 képlet alapján: számított: C = 55,40%, H = 6,51%, N = 15,64%, S = 0,83%. mért: C = 55,15%, H = 6,34%, N = 15,85%, S = 0,82%. (6) H-Sar-Tyr-Ser- Met-Glu-His-Phe -Arg-Try-Gly-Lys-Pro- Val-Gh/-Lys-Lys- Arg-Arg- Pro-Val-Lyj-Val-Tyr-Pro- OH acetát 65 3 ml, 2 ml anizolt és 0,2 ml tiogükolsavat tartalmazó trifluorecetsavban feloldunk 700114 5
