164903. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására 1-hidroxi- benztriazol- származékok jelenlétében

164903 10 til-3,4-dioxi-L-fenilalaninnal vagy /3-klór-alanin -nal is végrehajthatjuk. A találmány szerint előállított termékeketa védőcsoportok lehasitása után gyógyszerként alkalmazhatjuk, vagy egyéb, gyógyászatilag értékes peptidek, például Oxitocin, vasopressin, glükagon, ACTH, szekretin, tireokalcitonin vagy inzulin előállítására használhatjuk fel. A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. A példákban az aminosavak neveit a nemzetközileg elfogadott szabályok szerint röviditettük. Ezenkivül a következő rövidítéseket alkalmaztuk: Asn aszparaginil-csoport Gin glutaminil-csoport Z karbobenzoxi-csoport BOC terc-butiloxikarbonil-csoport NPS o-nitrofenilszulfenil-csoport -OCH3 metoxi-csoport -ONB p-nitrobenzil-oxi-csoport -OBu1

terc-butil-oxi-csoport -OSu N-hidroxi-szukcinimid-oxi-csoport -ONp 4-nitrofenil-oxi-csoport -OTCP triklórfenll-oxi- csoport -OBT 1 -hidroxi-benztriazol-oxi-csoport Mbh 4,4' -dimetoxi-benzhidril-csoport Mmb cC,cC-dimetil-4-metoxi-benzil-csoport DMF dimetilformamid CHA ciklohexilamin DCC diciklohexilkarbodiimid -OBz benzilészter-csoport THF tetrahidrofurán DMA dimetilacetamid -Bz benzil- csoport 10 15 Az elegyet 5 órán át o C°-on, majd körülbelül 15 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, körülbelül 30 ml etilacetáttal higitjuk, a kivált csapadékot kiszűrjük, a szürletet telitett nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, 2 n citromsavoldattal, telitett nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, majd vizzel mossuk, nátriumszulfát fölött szárítjuk, bepároljuk, és a maradékot etilacetátban 3 g bázikus aluminiumoxidon (Woelm, I. aktivitási fok) kromatografáljuk. A körülbelül 40 ml térfogatú eluátumot bepároljuk és a maradékot körülbelül 5 ml 8-9 n metanolos sósavoldatban oldjuk. Az oldatot bombacsőben 24 órán át 70 C°-on tartjuk, majd bepároljuk, és ezután F. Weygand és mtsai módszerével vizsgáljuk. Az eredményeket az 1. táblázatban (1. 4. oldal) közöljük. 2. A diciklohexil-karbodiimiddel és l-oxi-1,2, 3-benztriazollal illetve N-hidroxi-szukcinimiddel 20 aktivált peptidek racemizáciőjának vizsgálata 378,5 mg (1 mmol) BOC-Leu-Phe-OH-t és az adalékanyagot 2 ml abszolút DMF-ban illetve tetrahidrofuránban oldjuk. Az oldatot 0 C°-ra hűtjük, és 207 mg (1 mmól) DCC 1 ml abszolút DMF-dal illetve tetrahidrofuránnal készitett, 0 C°-os oldatát adjuk hozzá. Az elegyet 2 órán át 0 C°-on állni hagyjuk. Ezután az elegyhez 209,7 mg (1 mmól) H-Val-OBut.HCl-ot és 0,12 ml (1 mmól) N-etilmorfolint adunk, és 3 órán át 0 C°-on, majd körülbelül 15 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az elegyet az 1.1. példában leirt módon dolgozzuk fel. Az eredményeket a 2. táblázatban ismertetjük. 25 30 35 Ha a konfigurációt külön nem tüntetjük fel, mindig L-izomereket értünk. I. példa A racemizáció gázkromatográfiás vizsgálata F. Weygand és mtsai szerint [Chem. Ber. 99, 1451-1460 (1966]] A leirt módszert annyiban változtattuk meg, hogy Z-Leu-Phe-OH helyett BOC-Leu-Phe-OH-t használtunk fel. Ennek az az előnye, hogy a képződött, teljesen védett BOC-Leu-Phe-Val-OBu1

és BOC-Leu-LD-Phe-Val-OBut

peptid a védőcsoportok előzetes lehasitása nélkül hidrolizálható. 1. A diciklohexilkarbodiimid és különféle adalékanyagok jelenlétében végzett szintézis során fellépő racemizáció vizsgálata 2 ml abszolút DMF-ban illetve tetrahidrofuránban 378,5 mg (1 mmól) BOC-Leu-Phe-OH-t és 209,7 mg (1 mmól) H-Val-OBu1

. HCl-t oldunk. Ezután az elegyhez hozzáadjuk az adalékanyagokat, végül 207 mg (1 mmól) DCC 1 ml abszolút dimetilformamiddal illetve tetrahidrofuránnal készitett, 0 C°-ra hűtött oldatát adjuk az elegyhez. 2. táblázat 40 A diciklohexil-karbodiimiddel és 1-hidroxi-benztriazollal illetve N-hidroxi-szukcinimiddel aktivált peptidek racemizáciőjának vizsgálata 45 50 55 60 Mólekvivalens Adalékanyag Oldószer D-Phe-L-Val % 1 N-hidroxi-szukcinimid DMF 2,3 1,2 N-hidroxi-szukcinimid DMF 2,3 2 N-hidroxi-szukcinimid DMF 1,65 1 1-hidroxi-benztriazol DMF 4,4 1,2 1 -hidroxi-benztriazol DMF 8,4 2 1 -hidroxi-benztriazol DMF 9,3 1 1 -hidroxi-benztriazol THF <1,0 3. BOC-Leu-Phe-OH előállítása 38 g fenilalanint 345 ml dioxánban és 115 ml 2 n nátriumhidroxid-oldatban oldunk. Az oldathoz 38 g BOC-Leu-OSu-t adunk, és az elegyet körül-65 belül 20 órán át szobahőmérsékleten keverjük. 5