164903. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására 1-hidroxi- benztriazol- származékok jelenlétében
21 1 64903 22 6. Z-Asn(Mbh)-OH 27 g Z-Asn-OH és 24 g 4,4'-dimetoxibenzhidrol 250 ml jégecettel készített oldatához szobahőmérsékleten 0,5 ml tömény kénsavat adunk. Az ele- 5 gyet éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 750 ml vizbe öntjük. A kivált kristályokat kiszűrjük és meleg etilacetátban oldjuk. Az etilacetátos oldatot vizzel mossuk, nátriumszulfáttal száritjuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot 10 éterrel eldörzsöljük és szűrjük. 47,5 g (96%) terméket kapunk, op.: 176-180 C°, [oC]^= +2,4° (c = 2, dimetilformamid). H-Asn(Mbh)-OH 15 49,2 g Z-Asn(Mbh)-OH-t 400 ml jégecetben szuszpendálunk, és szokásos mődon katalitikusan hidrogénezünk. A hidrogénezés befejeződése után a katalizátort kiszűrjük, és a szUrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot nátriumacetát-oldattal eldörzsöljük, a terméket szűrjük, vizzel alaposan mossuk és P2O5 fölött száritjuk. 33,6 g (94%) terméket kapunk, op.: 215-217 C°. NPS-Asn(Mbh)-OH. CHA 33,6 g H-Asn(Mbh)-OH-ot 46 ml 2 n nátriumhidroxid-oldat és 116 ml dioxán elegyében oldunk. Az elegy pH-ját 8 értéken tartva részletekben 19,6 g o-nitroszulfenilkloridot és 46 ml 2 n nátriumhidroxid-oldatot adunk az elegyhez. Az elegyet 930 ml vizzel higitjuk, citromsavval pH = 3 értékre savanyitjuk, és a vizes fázist etilacetáttal kétszer extraháljuk. Az etilacetátos oldatot. nátriumszulfát fölött száritjuk és ciklohexilaminnal meglugositjuk. A kivált sárga kristályokat kiszUrjük és etilacetáttal mossuk. 47,5 g (85%) terméket kapunk, op.: 182-184 C°, [oC]22 = -29,8° (c = 1, d imetilf or mamidban). NPS-Asn(Mbh)-OSu 18,6 g (30,5 mmol) NPS-Asn(Mbh)-OH.CHA-ot 0 C°-on etilacetát és körülbelül 80 ml 2 n citromsavoldat között megosztunk. Az etilacetátos fázist 2 n citromsavoldattal mossuk, nátriumszulfát fölött száritjuk és bepároljuk. A maradékot 100 ml tetrahidrofuránban oldjuk, 3,45 g (30 mmől) N- hid roxi- szukcinimiddel elegyitjűk, 0 C°-ra hütjUk, és 6,2 g DCC hideg tetrahidrofurános oldatával elegyitjűk. Az elegyet 1 őrán át 0 C°-on, majd 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük, kevés dimetilformamidot adunk hozzá, a kiváltdiciklohexilkarbamidot kiszűrjük, és a szUrletet bepároljuk. A maradékot izopropanollal forraljuk. 14,3 g (77%) terméket kapunk, op.: 172-174 C°, [oC-Jí? = = +15,3° (c = 2, DMF). 7. NPS-Asn(Mbh)-Cys(Mmb)-OH.CHA 2,25 g (8,2 mmól) H-Cys(Mmb)-OH 20 ml dioxánnal és 4,1 ml 2 n nátriumhidroxid-oldattal készített oldatához keverés közben 2,5 g NPS-Asn-(Mbh)-OSu-t adunk, és az elegyet éjszakán át állni hagyjuk. A semleges oldatot bepároljuk, és a maradékot etilacetát és 2 n citromsavoldat között megosztjuk. A kivált csapadékot (amely a H-Cys-(Mmb)-OH fölöslege) kiszűrjük. Az etilacetátos fázist 2 n citromsavoldattal és vizzel mossuk és nátriumszulfát fölött száritjuk. A sót ciklohexilaminnal kicsapjuk. 2,45 g (69,5%) terméket kapunk, op.: 198-202 C°. 8. NPS-Asn(Mbh)-Cys(Mmb)-Pro-Lys(BOC)-Gly-NH-Mbh 4,3 g (5 mmől) NPS-Asn(Mbh)-Cys(Mmb)-OH. CHA-t jéghütés közben etilacetát és 2 n citromsavoldat között megosztunk. Az etilacetátos fázist 2 n citromsavoldattal és vizzel mossuk, nátriumszulfát fölött száritjuk és bepároljuk. A maradékot 20 ml DMF-ban oldjuk. Az oldathoz 3,15 g (5 mmől) H-Pro-Lys(BOC)-Gly-NH-Mbh.HCl-ot, 0,65 ml (5 mmól) N-etil-morfolint és 0,7 g (5 mmól) 1-hidr..óxi-benztriazolt adunk, 0 C°-ra hűtjük, és keverés közben 1,1 g DCC kevés hideg DMF-dal készített oldatával elegyitjűk. Az elegyet 1 őrán át 0 C°-on, majd 1 őrán át szobahőmérsékleten keverjük, a csapadékot kiszUrjük, és a szUrletet bepároljuk. A maradékot etilacetátban felvesszük és a VI.2. példában leirt módon mossuk. A maradékot semleges aluminiumoxidon (Woelm, I. aktivitási fok) kromatografáljuk, oldószerként tetrahidrofuránt alkalmazunk. 4,95 g (77%) terméket kapunk, op.: 160-164 C°,[OIC]Q 2 = -12,45° (c = 2, dimetilformamid -ban). VII. példa Aszparaginil- és glutaminilpeptidek szintézise 1. Z-Asn-Leu-OCH3 2.7 g (10 mmól) Z-Asn-OH, 1,7 g (10 mmől) H-Leu-OCH3-HCl és 2,7 g 1 -hidroxi-benztriazol 20 ml DMF-dal készitett oldatához 0 C°-on 1,28 ml (10 mmól) N-etil-morfolint, majd 2,1 g DCC kevés DMF-dal készitett, hideg oldatát adjuk. Az elegyet 1 őrán át 0 C°-on, majd 1 őrán át szobahőmérsékleten keverjük, a csapadékot kiszUrjük, és a szUrletet vizzel elegyitjűk. A kivált csapadékot kiszűrjük, nátriumhidrogénkarbonát-oldattal eldörzsöljük, szűrjük, vizzel mossuk, és foszforpentoxid fölött száritjuk. 3,35 g (85%) terméket kapunk, op.: 176 C°, |J*-]Q2 = -26,3° (c = = 2, metanolban). 2. Z-Gln-Ala-OBut 2.8 g (10 mmól) Z-Gln-OH, 1,8 g (10 mmól) H-Ala-OButHCl és 1,35 g (10 mmól) 1-hidroxi-benztriazol DMF-dal készitett oldatához 0 C°-on 1,28 ml (10 mmől) N-etilmorfolint, majd 2,1 g DCC kevés DMF-dal készitett hideg oldatát adjuk. Ezután a VIII. 1. példában leirt mődon járunk el. 5 10 25 30 35 40 45 50 55 60 11
