164903. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására 1-hidroxi- benztriazol- származékok jelenlétében
164903 23 3,0 g (73,7%) terméket kapunk, op.: 158-161 C°, [cC.]22= -36,0° (c = 2, metanolban). 2 ekvivalens 1-hidroxi-benztriazol jelenlétében 2,9 g (71,2%) terméket kapunk, op.: 158-161 C°. VIII. példa Z-Ser-Gly-ONB 10 2,4 g (10 mmől) Z-Ser-OH, 2,7 g (20 mmol) 1-hidroxi-benztriazol és 2,9 g H.Gly-ONB.Hbr 30 ml DMF-dal készített oldatához 0 C°-on 1,3 ml N-etil-morfolint, majd 2,2 g DCC DMF-dal készített hideg oldatát adjuk. Az elegyet 1 órán át 15 0 C°-on, majd 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük, ezután a II. 1. példában leirt módon dolgozzuk fel. 4.2 g (97,5%)terméket kapunk, op.: 121-123 C°, [oC]f)2 = -8,2 (c = 2, jégecet). 20 IX. példa 24 adjuk. Az elegyet 2 órán át szobahőmérsékleten keverjük, a karbamidot kiszűrjük, és 13,3 g (15 mmol) H-Gly-Pro-Pro-Gln-Lys(BOC)-Arg-OH, 1,5 CH3COOH.H 2 0 és 1,92 ml (15 mmól) N-etilmorfolin 80 ml DMF-dal készített oldatát adjuk az elegyhez. Az elegyet 2 órán át szobahőmérsékleten keverjük, az oldószert vákuumban lepároljuk, és a maradékot etilacetáttal eldórzsöljük. 17,1 g nyers terméket kapunk. A terméket etilacetátban háromszor felforraljuk, a szárított anyagot vizzel háromszor alaposan eldórzsöljük. 15,5 g (73,5%), vékonyrétegkromatográfiásan csak nyomnyi szenynyezést tartalmazó terméket kapunk. [oC|20=-80,0o (c = 2, metanolban). Aminosavelemzés: számitott: Glu2 Pro 9 Gly, Ala, Leu2 LySi Arg, Leu2,00 talált: Glu2>05 P rOlj84 Gly 0j98 Ala 1>y2 LySl,03 Arg 0,92 NH 3 : számitott: 1 ekvivalens talált: 1,09 ekvivalens Kortikotropin-(l -23)-trikozapeptid-amid 25 150 ml DMF-ban 8,25 g (5,5 mmől) BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OBut )-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH-t [a Chem. Ber. 96, (1963), 1080. oldalán leirt módon előállitott termék] és 12,5 g (5 mmól) H- 30 -Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg-Arg-Pro7Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-NH2-tritozilátot oldunk. (Az utóbbi vegyületet a következőképpen állítjuk elő: a Chem. Ber. 9^ 1197 (1964) szakcikkben leirt módon előállitott acetátot számitott 35 mennyiségű toluolszulfonsavval vízben elegyítjük, az oldószert vákuumban lepároljuk, és a maradékot piridin-éter elegyből kicsapjuk.) Az elegyhez 2,7 g (20 mmól) 1-hidroxi-benztriazolt adunk, majd 6,5 g (30 mmól) DCC 20 ml DMF-dal ké- 40 szitett oldatának 1/3-át adjuk szobahőmérsékleten az elegyhez. A fenti oldat 1/3-át 1 óra, maradék 1/3-át pedig további 1 óra elteltével adjuk az elegyhez. 2 óra elteltével a nyers terméket éterrel kicsapjuk. 19,9 g terméket kapunk. A védő- 45 csoportokat ismert módon, kevés tioglikolsavat tartalmazó 90%-os trifluorecetsavval végzett 1 órás kezeléssel lehasítjuk, a nyers trikozapeptidet éterrel kicsapjuk és éterrel mossuk. 19,1 g terméket kapunk. A terméket ismert módon karboximetil- 50 cellulózos kromatografálással tisztítjuk. X.l. példa A X. példában felhasznált kiindulási anyag előállítása a) Z-Lys(BOC)-Arg(N0 2)-OCH 3 (M = 596) 57 g (0,2 mól) H-Arg(N02 )-OCH 3 .HCl, 95 g (0,2 mól) Z-Lys(BOC)-OSués 500 ml DMF elegyét éjszakán át keverjük. Az oldószert vákuumban lepároljuk, a maradékként kapott gyantát etilacetátban oldjuk, és az oldatot 0 C°-on 2 n citromsavoldattal, nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vizzel mossuk. Az oldatot nátriumszulfát fölött szárítjuk, és az oldószert vákuumban bepároljuk. A kocsonyás maradékot éterrel eldórzsöljük és levegőn szárítjuk. 106 g (89%), vékonyrétegkromatográfiásan tiszta terméket kapunk. A termék kis mintáját elemzés céljára etilacetátból átkristályositjuk. Op.: 130-132 C°, [Í*-]Q = -12,5° (c = 1, metanolban). Elemzés a C H N O képlet (M = 595,6) alapján: számitott talált%: C = 52,4, H = 6,94, N = 16,5; C = 52,4, H = 7,1, N= 16,7. X. példa Z-Leu-Ala-Leu-GluiOBu^-Gly-Pro-Pro-Gln-Lys-(BOC)-Arg-OH (a sertés-proinzulin 54-63. tagjának megfelelő szekvenciáju peptid) előállítása A kiindulási peptid előállítását a X.l. példában ismertetjük. 11,5 g (18 mmól) Z-Leu-Ala-Leu-GluíOBu^-OH, 2,43 g (18 mmól) 1-hidroxi-benztriazol és 80 ml DMF elegyéhez -10 C°-on, keverés közben 3,7 g (18 mmól) DCC 25 ml DMF-dal készített oldatát 55 b) Z-Lys(BOC)-Arg(N02 )-OH 89 g (0,15 mől)az a) bekezdésben kapott észtert 240 ml víz és 500 ml dioxán elegyében oldunk. Az oldathoz 180 ml 1 n nátriumhidroxid-oldatot adunk, 45 percig szobahőmérsékleten, majd 30 60 ml 1 n sósavoldattal semlegesítjük. A dioxánt vákuumban lepároljuk, a vizes fázist etilacetáttal extraháljuk, majd 0 C°-on óvatosan 150 ml In sósavoldattal megsavanyitjuk, A kivált olajat etilacetátban felvesszük. Az etilacetátos oldatot viz-65 zel mossuk, az oldószert benzol hozzáadása után 12
