164899. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (')-vinkadifformán és sói,valamint adott esetben taberszonin,vinkadin ( )-kvebrachamin és (+)-1,2-dehidro-aszpidoszpermidin mellékalkaloidok
164899 3 4 szerinti eljárás alapja az a másik új felismerés is, hogy a fiatal hajtásokat egymást követően néhány hetes periódusokban 5—6 alkalommal is lehet vágni, miközben az új hajtásokban a hatóanyag koncentrációja nem csökken. Ilyen módon eljárva a termő területre számított hatóanyagtermelést többszörösére növelhetjük. Termesztési kísérleteink során 700 m2 területről egy április 30. és július 10. közötti periódusban egymást követően öt- alkalommal vágtuk le a fiatal hajtásokat. így összesen 60 kg szárított hajtást kaptunk, amiből főtermékként 180 g kristáyos (+)-vinkadifformint nyertünk ki rutin és mellékaikaloidok mellett. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy az Amsönia tabernaemontana hajtásokat vagy a hajtásokról lefosztott leveleket szárítás és aprítás után ismert módon, valamely rövidszénláncú alifás alkohollal extraháljuk, az extraktumból az alkaloidkeveréket a rutintól ismert módon elválasztjuk, ezután az alkaloidkeveréket valamely aromás szénhidrogénes, előnyösen benzolos oldatba visszük, az így nyert oldatot adott esetben valamely alifás szénhidrogén hozzáadása után adszorbenssel derítjük, majd a derített oldatból az aromás szénhidrogént, adott esetben rövidszénláncú alifás alkohol hozzáadása után, ledesztilláljuk és az így nyert száraz maradék rövidszénláncú alifás alkohollal készített oldatából, illetve az aromás szénhidrogén ledesztillálása után kapott alkoholos oldatból adott esetben végrehajtott beoltás után a (+)-vinkadifformint kikristályosítjuk vagy kívánt esetben valamely sav, előnyösen sósav hozzáadása után a (-f)-vinkadifformint sója, előnyösen hidrokloridja alakjában kristályosítjuk ki, majd kívánt esetben a (+)-vinkadifformin-bázis vagy -só kristályosításakor nyert anyalúgból további (+)-vinkadifformin-mennyiségét és értékes mellékalkaloidokat nyerünk ki oly módon, hogy a bázis kristályosításakor nyert anyalúgot bepároljuk és a maradékot, vagy a só anyalúgjából felszabadított alkaloidbázisokat valamely aromás szénhidrogénnel, előnyösen benzollal oldatba visszük, illetve benzolos oldatba visszük át, majd az oldatot szilikagél oszlopon kromatografáljuk, ezután aromás szénhidrogénnel eluálva az első frakcióból taberszonint és vinkadint, a második frakcióból további (+)-vinkadifformin-mennyiséget, majd ezután az elulálást előnyösen valamely rövidszénláncú alifás alkohollal folytatva a harmadik frakcióból (-)-kvebrachamint és (+)-l,2-dehidro-aszpidoszpermidint nyerünk ki. A szárított és aprított, zöld Amsonia tabernaemontana hajtások vagy azokról lefosztott levelek alkohol extraktumából ismert módon különíthetjük el a rutint. Eljárhatunk például úgy, hogy az extraktumot betöményítés után híg ásványi savval, célszerűen kénsawal elegyítjük, a kicsapódott ballasztanyago-kat szűrjük, majd a kivált rutint egy idő múlva kiszűrjük, vagy pedig az extraktumból ioncserélőn megkötjük az alkaloidkeveréket, majd eluáljuk. Az alkaloidkeverék aromás szénhidrogénnel készített extraktumához adott esetben valamely alifás szénhidrogént adunk, előnyösen petrolétert. A derítéshez adszorbensként előnyösen alumíniumoxidot használunk. Az aromás szénhidrogénnel készített, derített extraktumból az aromás szénhidrogént célszerűen úgy desztilláljuk le, hogy az oldathoz előzőleg alkoholt is adunk és ebből desztilláljuk ki az aromás szénhidrogént. Ez azért előnyös, mert a hőre érzékeny alkaloidok így kevésbé károsodhatnak, mint szárazra párlás esetén. Ha a benzolt alkohol hozzáadása nélkül desztilláljuk le, a maradékot alkoholban vesszük fel. Az alkoholos oldatból előnyösen betöményítés után, esetleg beoltassál kristályosítjuk ki a (+)-vínkadifformint vagy sav hozzáadása után a sóját. Sóként előnyösen a hidrokloridot állítjuk elő, ekkor az alkoholos oldathoz sósavat, célszerűen n sósavat adunk. A (+)-vinkadifformin-bázis anyalúgjából vagy a só anyalúgjából az alkaloidbázisok felszabadítása után, szilikagél-oszlopon végzett oszlopkromatografálás segítségével választjuk el és nyerjük ki a (+)-vinkadifformin maradékát és a mellékalkaloidokat. Az elválasztást előnyösen benzolos oldatban végzett kromatografálással hajtjuk végre. Az első frakció tartalmazza a taberszonint és vinkadint, ezeket a báziserősség alapján frakcionáló megosztással választjuk el. A második frakcióból nyerjük ki a vinkadifformint. Ezután az eluálást előnyösen alkohollal folytatva a harmadik frakcióból (-)-kvebrachamint és (+>1,2-dehidro-aszpiroszpermidint nyerünk ki, ezeket oszlopkromatográfiával választjuk el egymástól. Eljárhatunk úgy is, hogy a kristályosítás anyalúgjából csak a (+)-vinkadifformint nyerjük ki sóképzéssel. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 1. példa Amsonia tabernaemontana fiatal hajtásairól a leveleket lefosztjuk, megszárítjuk, majd kalapácsos darálóban átlagosan 0,5—1 mm szemcseméretig őröljük. A légszáraz őrleményből bemérünk 1,50 kg-ot, 5 litef metanolban 12 órán át áztatjuk, majd perkolátorban 30 liter metanollal szobahőfokon további 12 órán át kimerítően extraháljuk. A metanolos kivonatot csökkentett nyomás alatt mintegy 1,5 liter térfogatra pároljuk be, majd a sűrítményt 3 liter 2%-os kénsawal keverjük el. A kicsapódott sötét viaszos anyagok és klorofill eltávolítása után a savas oldatot 0 -on állni hagyjuk, miközben 70 g rutin válik ki. A rutin leszűrése után az oldatot hűtés és keverés közben 10%-os ammóniumhidroxid-oldattal 8-as pH-ig lúgosítjuk, majd a felszabadított alkaloidbázisokat 5X200 ml benzollal extraháljuk. A 15-16 g nyers alkaloidkeveréket tartalmazó benzolos oldatot csökkentett nyomáson kb. 80 ml térfogatra bepároljuk, azonos térfogatú petroléterrel hígítjuk és 50 g Brockmann II aktivitású alumínium-oxiddal derítjük. Az adszorbenst benzol és petroléter 1 :1 térfogatarányú elegyével öblítjük, majd a kapott halványsárga színű oldatot vákuumban szirupsűrűségűre koncentráljuk, 100 ml etanollal hígítjuk, és a maradék benzol eltávolítása céljából kb. 50 ml térfogatra pároljuk be. Az így nyert etanolos oldatot 200 ml n sósawal elegyítjük és 12 órán át 0°C-on tartva kristályosítjuk a (+)-vinkadifformin-hidrokloridot. A halványsárga színű terméket leszűrjük, n 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
