164703. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és berendezés kémiai, különösen enzimes analizisek elvégzésére
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1972. V. 5. (ZE-389) Német Demokratikus Köztársaság-béli elsőbbsége: 1971. V. 7. (WPG 01 n/154 932) Közzététel napja: 1973. VIII. 28. Megjelent: 1975. V. 31. 164703 Nemzetközi osztályozás: G 01 n 31/00 G 01 n 31/14 G 01 n 33/16 V Feltalálók: DR. THIELMANN Klaus orvos, Jena, DR. HORN Anton, orvos, Jena-Wöllnitz, SCHILLING Klaus egyetemi hallgató, Bad Klosterlausnitz, PFEIFER Otto mechanikus, Jena Német Demokratikus Köztársaság Tulajdonos: VEB Carl Zeiss Jena cég, Jena Német Demokratikus Köztársaság Eljárás és berendezés kémiai, különösen enzimes analizisek elvégzésére A találmány tárgya eljárás és berendezés kémiai, különösen enzimes analizisek elvégzésére rendkivül kis mennyiségű anyaggal. Ezeknél a vizsgálatoknál, például enzimaktivitás, szubsztrátumok vagy koszubsztrátumokkoncentrációjánakmérésénél 5 a vizsgálandó anyagot reagenssel keverjük össze, majd meghatározott reakcióidő után az anyagnak legalább egy részét hordozóanyagra visszük és a mérést kiértékeljük. Az enzimes analiziseknek rendkivül nagy gya- 10 korlati jelentó'ségUk van a biokémiai alapkutatások és az alkalmazott biokémia számos területén, mint például a klinikai-biokémiai diagnosztikában. Az enzimes analizisek jelentőségüket ezeknél a vizsgálatoknál rendkivül nagy érzékenységüknek köszön- 15 hetik. Céljuk vagy egy enzimaktivitás mérése (aktivitás vizsgálat), vagy egy reagens koncentrációjának meghatározása (szubsztrátum vizsgálat). Igen elterjedten és sokoldalúan használják oxidoreduktáz.reakciók optikai mérésénél, amelynek során niko- 20 tinamidadenindinukleotid koenzim (NAD) vagy nikotinamidadenindinukleotid foszfát sztöchiometrikus mennyiségeit redukálják vagy oxidálják, ami a fényabszorbciónak a hosszúhullámú ultraibolya tartományban történő megváltozásával jár együtt 25 (Warburg féle optikai teszt). Hasonló elven mérhetők olyan enzimreakciók is, amelyek nem közvetlen kapcsolatban folynak le az egyik vagy mindkét koenzimmel, egy nikotinamidadenindinukleotid (NAD) vagy nikotinamidadenindinukleotid foszfát a 30 (NADP) oxidoreduktáz-redukcióval összekapcsol (kapcsolt optikai teszt). Ezáltal ez a vizsgálat ig sok analitikai probléma megoldására alkalmas. A mérést nem csupán a fényabszorbciő (340vagy 366 nm) alapján, hanem hosszúhullámú ultraviola fénnyel történő aktiválással fluorimetrikusan is el lehet végezni, és ezzel az érzékenység tovább fokozható. Az enzimreakciók meghatározása az alábbi elvek alapján történhet: Szinezékek vagy leukobázisok alkalmazása szubsztrátumként, melyek a reakció folyamán sztöchiometrikus arányban, szines vagy szintelen termékké alakulnak át; Szinreakció kivitelezése végtermékkel egy további segédreakcióval; Gázok elhasználása, vagy képződése (pl. 021 NHg, C02 stb.) Az enzimreakciók kiértékelése az esetek legnagyobb részében fotometrikusan történik. Ehhez olyan fotométereket használnak, amelyeknek minősége a megfelelő pontosság elérésére alkalmas. A mérést általában egy vagy néhány mérőküvettában végzik, amelyeket egymás után helyeznek a berendezés sugárnyalábjába. Ezáltal az enzimes analizisnél a minta/idő arány elvileg korlátozott. Az enzimes analizissel végzett vizsgálatok hatékonyságát ezideig csupán néhány rendkivül bonyolult és költséges berendezéssel sikerült javitani. 164703
