164116. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fermentációs úton nyert nyers peptid-alkaloidbázisok tisztítására
3 164116 4 bázisokban együttesen fermentlé tartalomra számolva 80%. A fentiekben részletesen ismertetett, 1 158 380 angol szabadalmi leírás szerinti eljárást saját körülményeink között nem sikerült reprodukál- 5 nunk. Amint a fermentációt eltérő törzzsel, vagy táptalajon végezzük, a fáziscsere utáni extraktumból közvetlenül, vagy annak a mellékalkaloidokat elválasztó kromatografálása után a besűrített extraktum, vagy kromatográfiás eluátum magas 1Q ballasztanyag tartalma miatt a termék nem kristályosítható. A találmány célkitűzése olyan általános eljárás kidolgozása, mely sem a fermentációnál alkalmazott törzsre, sem a táptalajra nem korlátozódik és 15 a fermentáció során képződő és annak extraktumában feldúsuló ballasztanyagokat a termék kristályos kinyerése előtt hatékonyan eltávolítja. Megoszlási rendszer Kloroform/1%-os borkősavas víz Etilacetát/1%-os borkősavas víz Metilizobutilketon/1% borkősavas víz Fentiek miatt a peptid típusú anyarozs-alkaloidok és a ballasztanyagok a szokásos fáziscserés 35 vagy adszorpciós műveletekkel, vagy ezekből kombinált műveletsorral nem választhatók el egymástól olyan mértékben, hogy kielégítő tisztaságú — pl. a gyógyszerkészítményeknek is megfelelő minőségű — peptid típusú anyarozs-alka- 40 loidokat izolálhassunk, sőt sok esetben az alkaloidokat még kristályos állapotban sem sikerül előállítani. Megállapítottuk, hogy a peptid típusú anyarozsalkaloidokat termelő Qaviceps purpurea (Fr) Tul. szaprofíta tenyészetek szerves oldószerrel készült kivonataiban az alkaloidokat kísérő ballasztanyagok négy csoportba sorolhatók. A szennyezések vizsga- 50 latához az említett kivonatot szárazra pároltuk, vagy az alkaloidkémiából ismert módszerrel a kivonatból petroléteres lecsapással nyers anyarozs alkaloid-bázist állítottunk elő. A szárazmaradékot, vagy a petroléterbázist 15—20-szoros mennyiségű 55 kloroformban feloldottuk és az így nyert oldatot Brockmann II. aktivitású alumíniumoxiddal töltött adszorpciós oszlopra vittük fel. Eluensként kloroform és etilalkohol elegyét használtuk. Az elució folyamán az eluens alkohol-tartalmát 2-10% 60 között fokozatosan növeltük. Az elució során először egy színtelen (d) frakció, ezt követően egy vörös (c), majd egy sárga (b) frakció fogható fel. Az oszlop legfelső rétegében visszamaradó anyag az egyébként fehér adszorbenst szürkére (a) színezi. 65 A ballasztanyagok a peptidtípusú anyarozs-alkaloidok oldékonyságát és ezzel megoszlási tulajdonságait nagymértékben befolyásolják. Ezt igazolja az a tény is, hogy a szaprofíta tenyészetekben keletkezett peptid típusú anyarozs-alkaloidok vízzel nem elegyedő szerves oldószeres oldataiból — melyek a ballasztanyagokat is tartalmazzák — kimerítő savas-vizes extrakció esetében is csak kismértékben vihetők át a vizes fázisba, holott az alkaloidok — mint bázisok — savakkal sókat képeznek, melyek oldékonysága közismerten jobb vízban, mint oldószerben. Ezzel szemben a ballasztanyagoktól mentes tiszta peptid típusú anyarozs-alkaloidok a várt megoszlást mutatják. Az alábbi táblázatban hasonlítjuk össze a tiszta alkaloidok és a fermentációs úton nyert ballasztanyagokkal kísért ergotoxin tartalmú nyers alkaloid bázis megoszlási hányadosait. Megoszlási hányados Ergotoxin tartalmú nyers Tiszta ergotoxinn alkaloid bázis (ergotoxin tartalomban kifejezve). 0,1 0,01 57 0,11 0,28 0,10 Az» eluátum egyes frakcióit, valamint a nem eluálható szürek színű adszorbeátumból vizes alkohollal készített oldatot össztétel szempontjából megvizsgáltuk. A vizsgálat eredményét az alábbiakban foglaljuk össze: Szürke (a) frakció: oligo- és poliszacharidok, fehérjék, amino- és szerves savak, nukleotidok, továbbá a vízoldékony anyarozsalkaloidok kisebb része. Sárga (b) frakció: c. csoporton kívüli pigmentanyagok, köztük antrakinon-karbonsavak, továbbá a vízoldékony anyarozs-alkaloidok nagyobbik része. Vörös (c) frakció: antrakinon oxi- és metilszármazékai, továbbá peptid típusú anyarozs-alkaloidok egyik része. Színtelen (d) frakció: sejtlipidek, adalékdetergensek, továbbá a peptid típusú anyarozs-alkaloidok másik része. Különféle szerves oldószerekkel nyert fermentlé extraktumok vizsgálata szerint az alkalmazott oldószer minőségével az egyes ballaszt-frakciók aránya alig változik és az alkaloidtartalom egy esetben sem éri el az összes ballasztanyag mennyiségének 20%-át, szelektív oldószerhatás tehát nem érvényesül. 2
