163865. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikumok előállítására
163865 értékek mutatják. Az Rf értékeket a jelzett oldószer rendszerekben kapjuk, minden esetben Whatman No. 1 papirt használva. Az antibiotikum elhelyezkedését a kromatogramon bioautográfiával állapítottuk meg. Teszt mikroorganizmusként a vizsgálatokhoz a Sarcina lutea-t alkalmaztuk. Oldószer rendszer Rf érték a) 1 U.87 2 0,89 3 0,88 4 0,44 5 0,47 6 0,48 7 0,70 8 0,87 9 0,88 10 0.13 11 0,83 a) Az Rf-érték az antibiotikum által a k?zdőponttól megtett távolság és az oldószerfront által a kezdőponttól megtett távolság aránya. A fentiekben számokkal jelölt oldószerrendszerek a következó'k voltak: 1 - Vizzel telített butilalkohol, 2 - Vizzel telített butilalkohol plusz 2% p- toluolszulfonsav, 3 - Vizzel telített butilalkohol plusz 2% p-toluolszulfonsav plusz 2% piperidin. 4 - Vizzel telített metilizobutilketon, 5 - Vizzel telített metilizobutilketon plusz 2% p-tuoluolszulfonsav, 6 - Vizzel telített metilizobutilketon plusz 2% piperidin. 7 - 12:3:1 arányú víz-metilalkohol -aceton elegy, amelynek, pH-ját előbb ammóniumhidroxiddal 10,5-re állítjuk be. majd foszforsawal 7,5-re csökkentjük. 8 - 80%-os etilalkohol 1,5% NaQ-dal. A papirt 1 mólos nátriumszulfát oldattal impregnáljuk. 9-3:1 arányú metilalkohol-sósav elegy. A sósav-oldat 0,1 n töménységű. 10 - Vizzel telített benzol. 11 - 70:24:6 arányú víz-etilalkohol-ecetsav elegy. A kristályos A-201A vegyület szilikagél lemezeken (Brinkman szilikagél A-254 lemezek) előhívott vékonyréteg kromatogramjai az alábbi Rf-értékeket adták. Oldószer rendszer Rf-érték Etilacetát Etilalkohol elegy (4:1) 0,49 Etilacetát: etilalkohol elegy (1:1) 0,83 Detektor naftorezorcin Kénsav, UV-fény vagy bioautográfia -129,6° (C = 1, Az A-201A fajlagos rotációja [aj ** metilalkohol). A kristályos A-201A vegyület mágneses magrezonancia színképe 4-5 metil-csoport, aromás kötések és hidroxil-csoportok jelenlétét mutatja. Az acetilezett A-201A kb. 21,17%-ban tartalmaz acetil-csoportokat és a mágneses magrezonancia színkép triacetil-A-201 A jelenlétét jelzi. Az A-201B antibiotikum 25 C°-on a színtelentől a világosbarnáig változó színű olaj. Oldható alkoholokban, acetonban, kloroformban és etilacetátban és oldhatatlan vízben, szénhidrogénekben és éterben. Szilikagél kromatografáló oszlopról alkalmasan 9:1 arányú aceton-metilalkohol oldószereleggyel eluálható. Az A-201B 67%-os dimetilformamidos oldatban végrehajtott elektrometiriás titrálása 7,3-as kezdeti pH-t adott és a 3,5-13,5 pH tartományban titrálható csoportokat nem mutatott ki. A mikroelemzés az A-201B alábbi közelítő elemi összetételét adja: C 65,41; H 9,03; N 5,76; O 17,78. A gőznyomásozmózisos módszerrel meghatározott molekulasúly kb. 417. Az A-201B kloroformos oldatban felvett infravörös színképét a 2. sz. ábra mutatja be. Az infravörös elnyelési lü 15 20 25 .35 színkép 2,0-16,0 mikron tartományában észlelt megkülönböztethető sávok a következők: 2,77, 3,05, 3,45, 3.51, 5.90. 6,03, 6,20, 6.60, 6,86, 6,95, 7,10, 7.30-7,40, 8.30, 8,90-9,00, 9,64, 10,10, 11,20. 12,30, és 15,23 mikron. Az A-201B 95%-os etilalkoholos-vizes oldatában felvett ultraibolya elnyelési színképe EJ% = 515 extinkciós koefficienssel 222 mp körül; Ej 1% í 405 extinkciós koefficienssel 242 nuí körül; EJ* = 150 extinkciós koefficienssel 327 mn körül és Effm = 215 extinkciós koefficienssel 340 mu körül mutat elnyelési maximumot. Az A-201B vegyület viselkedését a papirkromatográfiás vizsgálatok során az alább feltüntetett Rf-érték mutatják. Az Rf-értékeket a jelzett oldószer rendszerekben kaptuk, minden esetben Whatman No. 1. papírt használva. Az antibiotikum elhelyezkedését a kromatogramon bioautográfiával állapítottuk meg, teszt mikroorganizmusként Sarcina lutea-t használva. Oldószer rendszer 1 2 Rf -érték") 0,65 0.92 A' Az Rf érték fogalmi meghatározása megegyezik a fent megadottal. Az oldószerrendszerek a következők voltak: 1 - Vizzel telített metilizobutilketon plusz 2% p-toluolszulfonsav és 1% piperidin. 2- 80%-os etilalkohol 1,5% nátriumkloriddal. A papirt 1 mólos nátriumszulfát oldattal itatjuk át. A találmány szerinti eljárással előállított új antibiotikumok gátolják az állati és növényi élet szempontjából kórokozó mikroorganizmusok növekedését, mégpedig baktériumokét és gombákét egyaránt és ezért jól.használhatók az ilyen mikroorganizmusok növekedésének megállítására. A találmány szerinti eljárással előállított új antibiotikumok a csöves hígitásos módszerrel egy sor reprezentatív mikroorganizmus esetében meghatározott és mikrogramm/ cm* egységekben kifejezett legkisebb gátló koncentrációit az alábbi 1. táblázatban foglaltuk össze. I. Táblázat Az A—201A és 201B antibiotikumok aktivitása 40 45 50 55 60 65 Mikroorganizmus Staphylococcus aureus Streptococcus feacalis Erwinia amylovora Botrytis cinerea Trichophyton mentagrophytes Xanthomonas phaseoli Lactobacillus casei Leuconostoc citrovorum Vibrio metschnikovii Mycobacterium avium Diplo coccus pneumoniae Neisseria meningitidis Mycoplasma gallisepticum Legkisebb gátló koncentráció mikrogramm/cm A-201A A-201B 1,56 6,25 12,50 25,00 12,50 25,00 100,00 0,39 25,00 3,12 50,00 50,00 12,50 n.v.a > 0,20 n.v. 25,00 n.v. 1,56 n.v. 6,25 n.v. 25,00 n.v. 0,78 n.v. 2
