163865. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikumok előállítására
163865 50,00 n.v. 3,12 100,00 50,00 100,00 50,00 n.v. 50,00 100,00 n.v. 50,00 n.v. 0,39 n.v. 50,00 n.v. 12,50 I. Táblázat folytatása! Pasteurella haemolytica Pasteurella multocida Escherichia • coli Escherichia insidiosa Salmonella spp. Candida tropicalis Ceratocystis ulmi Fusarium oxysporum F. lycopersici Verticillium albo-atrum n.v. - nem vizsgáltuk Az A-201A antibiotikum in vivo aktív csirkék Mycoplasma Galiisepticum fertőzései ellen. Ha például az A-201A-ból 5 mg-ot szubkután fecskendezünk be a mikroorganizmussal fertőzött csirke nyakába, a vegyület hatását a léghólyag károsodások számának csökkenése bizonvítia 100 mg/kg dózisban • perorálisan adva. az A-201 antibiotikumok keveréke hatásosnak bizonyul az Lntamoeba histolytica által fertőzött fiatal patkányok kezelésében. Az A-201 antibiotikum keverék 50 mg/kg dózisban intraperitóneálisan adva egérnek ugyancsak hatásos a Borrelia novyi okozta fertőzések leküzdésében. Az A-201 A antibiotikum szubkután injekcióban adva egérnek, in vivo mikrobaellenes hatású fertőző mikroorganizmusokkal szemben; az ED50 értékek (a kísérleti állatok 50%-ának életben tartásához szükséges dózis) a szemléltető példaként említett fertőzéseknél alkalmazott dózis esetében a következők: Staphylococcus aureus, 6,5 mg/kg; Diplococcus pneumoniae. 100 mg/kg; Streptococcus pyogenes C 203, 12 mg/kg. Az A-201A toxicitása: LD5Q (i-p.) = 400 mg/kg egereken. Az A-201 A antibiotikum ugyancsak hatásos a fogkörüli, periodontális megbetegedés kifejlődésében szerepet játszó mikroorganizmusok fejlődésének gátlásában is. Az A-201 A oldata például mikrobaeUenes aktivitást mutat foltképző (plaqueképző) mikroorganizmusokkal szemben. E hatást szemlélteti a következő kísérlet: Kémcsövekben elhelyezett 5% szacharóz tartalmú táptalajra fogszuvasodást okozó mikroorganizmust oltunk. A táptalajba üvegpálcákat merítünk és a kémcsöveket egy éjszakán át 37 C°-on inkubáljuk, amely után a pálca felületén foltréteg (elsősorban sejtek és dextrán) alakul ki. A pálcákat ezután az A-201A-t különböző koncentrációkban tartalmazó oldatokba visszük át és ezekben 5, 10 és 15 percnyi időtartamokra érintkezésben tartjuk az antibiotikummal. A megfelelő idő eltelte után a pálcákat két ízben steril, ionmentes vizzel öblítjük és 5% szacharózt tartalmazó be nem oltott táptalajba mártjuk. E táptalajokat egy éjszakán át 37 C-on inkubáltva, minden egyes táptalajhoz brómtimolkéket adunk. A növekedést olymódon mutatjuk ki, hogy észleljük a kék szin sárgára változását, amely a szacharóztartalmu közegben növekedett mikroorganizmusok által termelt sav hatására következik be. Az A-201A-val végzett vizsgálat során két kariogén Streptococcus spp.-t nevezetesen az A-31036-ot és az A-31037-et alkalmaztuk. Az A-201A vegyület, 1,0% koncentrációban mindkét mikroorganizmus növekedését megakadályozta, ha az oldat 5 percig érintkezett a teszt pálcával. Mikroorganizmus Legkisebb gátló koncentráció milcroeramm;cm3 Streptococcus mutans, NCPC 10449 (National g Collection Type Culture, London) Streptococcus sp. (azonosítatlan), A 31036-os törzs Szálasán növekvő 10 pálca (azonosítatlan), A 31038-as törzs Streptococcus sp. (azonosítatlan), A 31037-es törzs 1,0 2,0 2,5 1,5 I1 2 b 30 40 45 50 Sőt, az A-201A a kariogén mikroorganizmusok növekedését táptalaj hígitási tesztben is gátolja. A leírt teszt mikroorganizmusokra vonatkozóan például a következő legkisebb gátló koncentrációkat találtuk. 60 65 Az A-201A bekeverése megfelelő fogkrémbe, gélbe, porba vagy más ehhez hasonló készítménybe, vagy megfelelő szájvízbe, vagy inas szájápoló készítménybe hatékony módszert biztosíthat a fogszuvasodás kifejlődésének gátolásában. Vagy. az A-201 A megfelelő koncentrációjú oldatával átitatott tamponnal kezelhető a foghús és a fogak. Azt találtuk, hogy az A-201A antibiotikum az állatok növekedését is hatékonyan segíti elő. Négynapos csibék alaptakarmányához 45,4 g/tonna mennyiségben adagolva A-201A-t, 10-napos időszakban a súlygyarapodás és a takarmányozási hatásfok javulását észleltük. Az alaptakarmányban az A-201A antibiotikummal etetett kiscsibék súlya 160 g-mal gyarapodott, míg a csupán az alaptakarmányon tartott szárnyasok súlygyarapodása ugyanezen időszakon belül 148 g volt. A takarmányozási hatásfokok emellett olymértékben javultak, hogy az A-201 A-t kapott csibék 1 kg súlygyarapodás eléréséhez mindössze 1,38 kg takrmányra volt szükségük, míg a csupán az alaptakarmányon tartott csibék ugyanezen súlygyarapodás eléréséhez 1,52 kg takarmányt fogyasztottak el. Az új antibiotikumokat a találmány szerint olymódon állítjuk elő, hogy a Streptomyces családhoz tartozó mikroorganizmus egy A-201-et termelő törzsét megfelelő táptalajban iüllyesztett aerob körülmények között addig tenyésztjük, amig a táptalaj jelentós antibiotikus aktivitást nem mutat. A termelt antibiotikumokat különböző, a szakmában általánosan alkalmazott és önmagukban ismert elválasztó és tisztítási módszerekkel nyerhetjük ki. Az antibiotikum tartalmú táptalajból az A-201 A és A-201 B antibiotikumokat tartalmazó keveréket kapunk. Az egyes antibiotikumokat egymástól és a fermentációs keverék egyéb, kisebb mennyiségben jelenlévő alkotóitól elválasztjuk. Az A-201 A antibiotikumot kromatográfiával és kristályosítással kristályos alakban állíthatjuk elő. Az A-201B antibiotikumot szobahőmérsékleten olaj alakjában kromatográfiával kaphatjuk meg. A találmány szerint az antibiotikum keverek termelésére használt Actinomyces-t a Streptomyces capreolus Higgens egy törzseként azonosítottuk és korlátozás nélkül hozzáférhető módon a Northern Utilization Research and Development Laboratory, Aricultural Research Service, United States Department of Agriculture, Peoria, Illinois állandó kultúra gyűjteményében NRRL 3817 szám alatt helyeztük letétbe. A törzset Venezuelában gyűjtött talajmintából izoláltuk, olymódon, hogy a minta adagjait csiramentesített, steril desztillált vízben szuszpendaltuk es a szuszpenziót agar táptalajra kentük. A leoltott agart tartalmazó csészéket 25-35 C°-on növekedés észleléséig inkubáltuk. Az inkubációs idő végén az A-201-et termelő mikroorganizmusok telepeit steril platina kacs segítségével ferde agar táptalajra vittük át. A ferde tenyészeteket ezután inkubáltuk, hogy a A-201-es termeléséhez elegendő mennyiségű inokulumot kapjunk. ; A találmány szerinti eljárás során alkalmazott A-201-termelő Streptomyces capreolus törzs főbb morfológiai jellemzői a következők: Az oválistól a kissé hengeresig terjedő alakú sima spórák hosszú, csavarodó, összefűződött láncokban helyezkednek el, lánconként általában 10-50 spórával, némely láncban 50 plusz spórával. A spórák méretei az 1.005-2,01 x 0,67-1,005 mikron határok között változ-3
