163848. lajstromszámú szabadalom • Eljárás prosztaglandinok előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY Bejelentés napja: 1971. IX. 28. (Cl-1167) Közzététel napja: 1973. VI. 28. Megjelent 1975. IV.28. 163848 Nemzetközi osztályozás' C 07 c 61/06, 61/32, 61/36, 61/16, /Jps uíiíimj 'ÍI/I jdoni Stadler István biológus 13,8%, dr. Kovács Gábor vegyészmérnök 13,8%, dr. Mészáros Zoltán vegyészmérnök 13,8%, Rádóczi Julia vegyész 13,8%, Simonidesz Vilmos vegyészmérnök 13,8%, dr. Szántay Csaba vegyészmérnök 13,8%, Székely István vegyész 13,8%, Szatmáry Csaba gyógyszerész 3,4%, Budapest. Tulajdonos CHINOIN Gyógyszer- és Vegyészeti Termékek Gyára Rt., Budapest. Eljárás prosztaglandinok előállítására 1 A prosztaglandinok biológiai hatással rendelkező lipidek jelentős csoportját képezik. Rövidítésük: PG. Szerkezetüket a 20 szénatom-számú „prosztán-sav" váz alkotja. Osztályozásuk a molekulában levő kettős kötések helyzete és szubsztituensek térállása alapján történik. (Prostaglandins. P.W. Ramwell et al.: Progress in the Chem. of Fats and other Lipids, Vol. IX, Polyunsaturated acids, part 2, p. 233). A prosztaglandinok fiziológiai és farmakológiai hatása igen széleskörű, a teljes hatásmechanizmus még nincs megfelelően tisztázva. Jelentősebb hatást fejtenek ki reproduktív-, kardiovaszkuláris-, légző- és keringési szervekre. A PGE sorozat tagjai erősebb simaizom stimuláló hatással rendelkeznek, mint a PGF sorozat tagjai. A PGE, -, PGF, - és PGA, -ről kimutatták, hogy altatott állatokon az arteriális vérnyomás csökkenését okozzák. A PGE származékok terápiás és nem terápiás abortuszt idézhetnek elő, illetve az oxitocinhoz hasonlóan szülés megindítására alkalmazhatók. A PGE, gátolja a gyomor szekréciót és epinetrin antagonista (antilipolitikus hatású). Ugyanez a prosztaglandin származék alkalmazható aerosolos-spray-ként asztmás rohamok enyhítésére. Kimutatták, hogy PGE származékok a trombózis képződést gátolják. A teljes kliniko-farmakológiai hatásról Bergström et al: Pharmac. Rev. Bd. 20. SI. (1968) illetve Prostaglandins, ed. by P. Ramwell and. JE. Shaw. Annals ol the New-York Academy Sciences. Vol. 180. April. 30. 1971. közlemények adnak részletes tájékoztatást. A prosztaglandinok előállítására több kémiai totálszintézist dolgoztak ki. A szintézisek egy része során szabad sav keletkezik, másik része szerint a totálszintetizált prosztaglandin észterből állítják elő a szabad savat. Más ismert eljárás szerint a megfelelő telítetlen zsírsavakat egy, a Subphylum II vagy Phylum III. 163848 fajhoz tartozó mikroorganizmus enzimrendszerével oxidatív gyűrűzárásnak vetik alá. (3.290.226 sz. USA-beli szabadalmi leírás.) A szabad sav tisztítása nehézkes, az észteré azonban 5 könnyen megoldható. Ezért előnyös az észterből kiinduló szabad sav előállítás. A szabad sav előállítása észterből nemcsak a totálszintetizált termék előállításánál merül fel, hanem a természetes előfordulási forma is számos esetben az észterforma, melyet 10 hidrolízis útján alakítanak félszintetikus termékké. (J. Am. Chem. Soc. 94,2122, 1972.) A totálszintetizált prosztaglandin észterből történő szabad sav előállításnál az észter hasítást a végtermék károsodása nélkül kell megoldani. ! 5 A hidrolízis az irodalom szerint kémiai vagy mikrobiológiai (fermentációs) úton történik. A kémiai hidrolízis nehézkes, több lépéssel meghosszabbítja a szintéziseket és gyenge termelést eredményez. 20 Mikrobiológiai úton (1,937.678 sz. NSZK-beli közzétételi irat) „aciláz" enzimrendszerrel valósítják meg az észterhasítást PGE,-metilészterből. Az optimálisnak talált Cladosporium resinea (Cl—II, ATCCU-274) mikroba törzset megfelelő tápoldatban elszaporítják, majd centrifugálással a sejteket 25 elválasztják. Ezután a sejtek feltárása következik foszfát pufferben, majd ismét centrifugálás és a kapott felülúszó folyadék tartalmazza a nem specifikált „aciláz" enzimrendszert. Ebben a folyadékban végzik a hidrolizist (12 ml enzim tartalmú folyadék, 129 ml (dl) PGE,-metilészter, 20 óra), 30 majd aceton hozzáadása után bepárolják és oszlopkromatográfiásan tisztítják a nyers terméket, amelyből 33 mg PGE, savat (30%) kapnak és 66 mg észtert regenerálnak. Ugyanebben a közzétételi iratban 50 mg optikailag aktív PGE,-metilészterből 30 mg kristályos PGE, szabad savat állítanak 35 elő. Kitermelés 60%.