163794. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szaramicetin elkülönítésére

163794 3 . 4 tisztább terméket kapunk. Ez a lényegileg három lépéses eljárás legalább olyan tiszta terméket szolgáltat, mint a régebbi eljárások. Ezenfelül a találmány szerinti három lépéses eljárás lényegeién egyszerűbb, olcsóbb és hatékonyabb, mint a régebbi eljárások, és ipari méretekben megvalósítható. A jelen tanulmány tárgya tehát új eljárás a Streptomyces saraceticus fermentálásával keletkezett szaramicetin antibiotikum elkülönítésére. Ez az eljárás abból áll, hogy a fermentléből kapott szűrőlepényt metanolban szuszpendáljuk, a metanolos kivonatot közömbösítjük, ebből az oldatból a metanolt eltávolítva vizes koncentrátumot készítünk, azt butanollal extraháljuk, a kivonatot közömbösítjük, majd koncentráljuk, a butanolos koncentrátumot nem poláris oldószerrel keverve 20— 35%-os tisztságú nyers terméket csapunk ki, és ezt a terméket tovább tisztítjuk azáltal, hogy oldatát részlegesen dezaktivált alumíniumoxidot tartalmazó oszlopon kromatografáljuk. így 80%-os vagy még tisztább terméket kapunk. A szaramicetin terméket a fermentléből előnyösen úgy különítjük el, hogy a fermentléből kapott szaramicetin szűrőlepényt metanolban vagy metanol és víz 50 : 1 és 15 : 1 közötti arányú elegyében szuszpendáljuk, a metanol eltávolítása után a viszszamaradt koncentrátum pH-ját beállítjuk 3,2 és 3,7 közé, a koncentrátumot butanollal vagy butanol és víz 20: 1 és 6 : 1 közötti arányú elegyével extraháljuk, a butanolos kivonatok pH-ját közömbösre (7,0—7,5) állítjuk be, a butanolos kivonatokat hexánnal vagy más nem poláris oldószerrel, például dietiléterrel, benzollal, xilollal, ciklohexánnal vagy heptánnal keverjük, hogy a 20—35%-os tisztaságú nyers szaramicetin terméket kicsapjuk, és a nyers terméket 80%-os vagy ennél tisztább termékké alakítjuk azáltal, hogy részlegesen dezaktivált alumíniumoxidot tartalmazó krömatögrafáló oszlopon bocsátjuk át. A találniány szerinti eljárás végrehajtása során a szaramicetin kinyerésekor a fermentíevet 25 — 5 C°-ra, előnyösen 15—10 C°-ra hűtjük, és a habot habzásgátlószer, például Dow-Corning AF Antifoam vagy disznózsírból préselt olaj hozzáadásával eltávolítjuk. Hogy a fermentlé pH-ját a közömbös kémhatásról 3,7— 3,2-re, előnyösen 3,5-re csökkentsük, a ferméntléhez literenként 2,5—8,0 g alumíniumszulfátot vagy savas kémhatású sót, például alumíniumfbszfátot és ásványi savat, például kénsavat vagy foszforsavat adunk vizes oldat alakjában. Az így kezelt fermentíevet szűrőre viszszük, és a kapott szűrőlepényt térfogata 0,5— 1,2-szeresét, előnyösen 0,6— 1,0-szeresét kitevő metanolban vagy metanol és víz elegyében szuszpendáljuk. A metanolos szuszpenziót 0,5 — 2 óra, előnyösen 1,0—1,2 óra hosszat keverjük, majd szűrőn elválasztjuk. A metanolban dús kivonat pH-ját vizes lúgoldattal közömbösre (6,5—7,5 pH), előnyösen 7,0-ra állítjuk be, és a metanolos kivonatot például vákuumban bekoncentráljuk, hogy lényégében az összes metanolt eltávolítsuk, és vizes koncentrátum maradjon vissza. A koncentrátum pH-ját savval, például 75— 85 %-os foszforsavval 3,2—3,8-ra, előnyösen 3,5-re állítjuk be, és a megsavanyított koncentrátumot 3—6-szor, előnyösen 3-szor mindegyik esetben térfogatának 0,5—1,0-szeresét, előnyösen 3/4-szeresét kitevő butanollal extraháljuk. A butanolos kivonatokat egyesítjük, 5 az oldat pH-ját vizes lúgoldattal közömbösre (7,0— 7,5-re) állítjuk, és vákuumban legfeljebb 45 C°-on térfogatának egytizedére bepárqfjuk. A koncentrátumhoz a nyers termék kicsapltsára 2—6 térfogat, előnyösen 3 térfogat hexánt adunk. 10 A szuszpenziót 1 — 2 óra hosszat 5—10 C°-on tartjuk, majd á nyers terméket szűrőn elválasztjuk, és hexánnal mossuk. A keletkezett szűrőlepényt 35—45 C°-on, előnyösen 40 C°-on lényegileg állandó súlyig szárítjuk. A kapott nyers termék 20— 15 35% vagy nagyobb tisztaságú. A nyers terméket részlegesen dezaktivált alumíniumon való kromatografálással közvetlenül tovább tisztítjuk anélkül, hogy úgy mint a régebbi eljárásokban, szótválasztó extrahálásra vagy meg-20 oszlásos kromatografáló oszlopra lenne szükség. Az alumíniumoxidot 13—18%, előnyösen 15% víz hozzákeverésével dezaktiváljuk. Az oszlop magasságának és átmérőjének aránya tág határok között, például 1: 1 és 3 : 1 között változhat. A tisztítandó 25 poralakú nyers termékből 3—6%-os, előnyösen 4—5%-os metanolos oldatot készítünk, ós ezt az oldatot átbocsátjuk az alumíniumoxiddal töltött oszlopon. A nagy tisztaságú antibiotikumot tartalmazó frakciókat egyesítjük, ós térfogatuk 1/15— 30 1/25-ére, előnyösen 1/20-ára bepároljuk, majd nem poláris oldószer, például hexán vagy aceton és hexán előnyösen 50 : 50 arányú elegyének hozzáadásával a terméket kicsapjuk. A csapadékot tálcán szétterítjük, és állandó súlyig szárítva pisz-35 kosfehér vagy nagyon világos sárgásbarna port kapunk. A szaramicetint Streptomyces saraceticus tenyésztésével termelhetjük. A tenyészet közepes hőmérsékleten aerob, és jellemző rá, hogy a termelt 40 micélium erősen elágazó. A fermentálás végrehajtása során azt tapasztaltuk, hogy a szaramicetin számos nitrogónforráson, például szöjababliszten, gyapotmagliszten, halliszten, peptonokon, élesztőn, szeszmoslékori és 45 kazein hidrolizátumon jól tenyészik. Szintetikus táptalajon alanint, arginint, glutaminsavat, lizint és valint alkalmazva a növekedés jó. A tenyésztésre sokféle szénforrás használható, ilyenek a glükóz, szacharóz, keményítő, laktóz, maltóz és mannit. 50 Az antibiotikum termelésére előnyös folyékony táptalaj 2% szójabablisztet, 2% nyers cukrot, 0,5% kukoricalekvárt, 0,1% dikáliumhidrogénfoszfátot és habzásgátlószerként disznózsírból préselt olajat tartalmaz. 55 A következő példa szemlélteti a találmány gyakorlati végrehajtását. A hőmérsékleti adatokat Celsius-fokban adjuk meg. Példa 60 (1) Fermentálás A fermentálás minden szakaszában a következő összetételű folyékony táptalajt használjuk: 65 kukoricalekvár 0,5% 2