163787. lajstromszámú szabadalom • Eljárás angiotenzin-I-nok angiotonzin II-vé való inzimes átlakítását akadályozó peptidek előállítására

163787 11 12 e) Triptofü-prolil-arginil-prólü-glicü-prólü-glutaminű-izólexuyil-prolil-prólin A címben megnevezett vegyületet az 1. példa g) szakaszában leírt módon állítjuk elő, de a tercbutoxikarbonil-O-benzil-treonintterc-butoxikarbonil-glicinnel helyettesítjük. Aminosav-összetétele: Arg 0,95, Glu 1,05, Pro 5,05, Gly 1,05, Ileu 0,90. Papírkromatográfiai Rf értéke 0,74. f) Piroglutamil-triptofil-prolil-arginil-prolilrglicil-prolü-glutaminil-izoleucil-prolin A cím szerinti végső terméket az előző e) szakaszban kapott dekapeptidnek piroglutaminsavval való reagáltatásával alítjuk elő az 1. példa h) szakaszában leírt módon. Aminosav-összetétele: Glu 2,01H Pro 5,4, Arg 0,92, Ileu 0,89, Gly 1,0. Papírkromatográfiai Rf értéke: 0,52. 6. példa Piroglriktmű-glicilrglicil-triptofil-prolű-arginil-prolil-glicil-prolil-gltitaminil-izoleucil-prolű-prolin Az 5. példa e) szakasza szerint kapott dekapeptidet az előzőkben leírt módon glicinnel, glicinnel és piroglutaminsavval reagáltatva a cím szerinti vegyületet kapjuk. Kovasavgél-vékonyrétegen metanol kifejlesztőszerrel megállapított Rf értéke: 0,1; papírkromatográfiai Rf értéke: 0,5. Aminosav-öszszetétele: Glu 2,01, Pro 5,25, Gly 3,05, Ileu 0,91, Arg 0,93. 7. példa Piroglutamil-triptofil-prolil-arginil-prolil-treonil~prolil-glutaminil-izoleucil-prolil-prolin a) Piroglutamil-triptofil-prolil-arginil-prolil-treonil-prolin Az 1. példa a) szakaszában leírt módon készült terc-butoxikarbonil-prolin gyantából kiindulva a következő hat védőcsoportot eltávolító és kapcsoló műveletet hajtjuk végre: 1. négyszer mossuk diklórmetánnal, vízmentes etanollal és ecetsavval; 2. egyszer mossuk n sósavval 5 percig és egyszer 25 percig; 3. négyszer mossuk ecetsavval, vízmentes etanollal és kloroformmal; 4. kétszer mossuk kloroform és trietilamin elegyével; 5. négyszer mossuk kloroformmal és diklórmetánnal; 6. terc-butoxikarbonil-O-benziltreonint és diciklohexilkarbodiimidet kapcsolunk diklórmetánban. Ezt a műveletsorozatot megismételjük, az utolsó lépésben sorban a következő vegyületeket használva : terc-butoxikarbonil-prolin, terc-butoxikarbonil-nitroarginin, terc-butoxikarbonil-prolin, terc-buto-xikarbonil-triptofán és piroglutaminsav. A nitroarginin, triptofán és piroglutaminsav-maradékok esetében az oldószer diklórmetán és dimetilformamid 5 : 2 térfogatarányú elegye. A részben védett 5' peptidet (piroglutamil-triptofil-prolil-nitro-arginilprolil-O-benzil-treonil-prolint) a gyantáról anizolt és merkaptoetanolt tartalmazó trifluoracetátos hidrobromid oldattal távolítjuk el. A többi védőcsoport katalitikus hidrogenolízissel való eltávolí-10 tása után kapott címben megnevezett termék kovasavgól-vékonyrétegen 7 : 3 térfogatarányú n-propanol-ammónia kifejlesztőszerrel megállapított Rf értéke 0,56. Aminosav-összetétele: Glu 1,0, Pro 3,0, Thr 0,95. 15 b) Glutaminil-izoleucil-prolil-prolin A címben megnevezett tetrapeptidet az 1. példa a) szakaszában leírt módon állítjuk elő. 20 ) c) Az a) szakaszban kapott heptapeptidet és a b) szakaszban kapott tetrapeptidet a már leírt módon kapcsoló reagensként diciklohexildikarbodiimidet alkalmazva piroglutamil-triptofil-prolil-arginil-jpro-25 lil-treonil-prolil-glutaminil-izoleucil-prolil-prolinná egyesítjük. A termék kovasavgél-vékonyrétegen 9 : 1 térfogatarányú dioxán-víz kifejlesztőszerrel megállapított Rf értéke 0,05; papírkromatográfiai Rf értéke 0,53. Aminosav-összetétele: Thr 0,94, 30 Glu 2,06, Pro 4,5, Ileu 0,96, Arg 1,0. 8. példa PirogliUamil-triptofil-prolil-arginil-proliUglicil-prooK lil-glutaminil-izoleitcil-prolű-prolin a) Piroglittomil-triptofil-prolil-arginű-prolü-glicil-prolin A címben megnevezett vegyületet a 7. példa a) szakaszában leírt módon állítjuk elő, de a (6) lépésben a terc-butoxikarbonil-O-benzil-treonin helyett terc-butoxikarbonil-glicint használunk. Aminosavösszetétele: Arg 0,95, Glu 1,0, Pro 3,1, Gly 0,98. Papírkromatográfiai Rf értéke 0,45. b) Pirogltdamil-triptofil-prolü-arginil-prolil-glicű-prolil-glniaminil-izoleucH-prolil-prolin A 7. példa c) szakaszában leírt nódon eljárva, de 50 a piroglutamil-triptofil-prolil-arginil-prolil-treonüprolin heptapeptid helyett a fenti a) szakaszban kapott heptapeptidet használva a cím szerinti terméket kapjuk. Papírkromatográfiai Rf értéke 0,52. Aminosav-összetétele: Glu 2,10, Pro 5,4, Arg 0,92, 55 Ileu 0,89, Gly 1,0. 9. példa Piroglutamil-glicű-glicil-triptofil-prolil-arginil-pro-60 lií-glicű-prolil-gliitaminil-izole^ű^olil-prólin 1 g gyantára 0,2 mmól prolint tartalmazó 10 g butoxikarbonil-prolin gyantához a 7. példa a) szakaszában leírt módon sorban a következő amino-65 savakat kapcsoljuk: prolin, izoleucin, glutamin, 6