163787. lajstromszámú szabadalom • Eljárás angiotenzin-I-nok angiotonzin II-vé való inzimes átlakítását akadályozó peptidek előállítására

163787 5 6 ;almazó 8 g terc-butoxi-karbonü-prolin-polisztirol gyantából indulunk ki, és azt éjjelen át diklórméánnal keverjük. A diklórmetánt szűréssel eltávoítjuk, és a gyantát a következő műveleteknek retjük alá: (1) Diklórmetánnal, vízmentes etanollal és ecet-Savval 4—4 ízben mossuk. (2) Öt percig 80 ml ecetsavas n hidrogénklorid oldattal rázzuk, a műveletet 25 percig folytatva friss ecetsavas n hidrogénklorid oldattal, (3) Ecetsavval, vízmentes etanollal és diklórmetánnal 4—4 ízben mossuk. (4) öt percig 28 ml 10% trietilamint tartalmazó kloroformmal rázzuk, és ezt a műveletet egyszer megismételjük. (5) 4—4 ízben kloroformmal és diklórmetánnal mossuk. (6) 2,57 g terc-butoxikarbonil-prolinnak 56 ml ' diklórmetánnal készült oldatával 20 percig rázzuk. (7) Hozzáadjuk 2,5 g diciklohexilkarbodiimidnek 4 nil diklórmetánnal készült oldatát, és a rázást 3 óra hosszat folytatjuk. (8) Mégismételjük az (1), (2), (3), (4) és (5) lépést. (9) Hozzáadjuk 2,9 g terc-butoxikarbonil-izoleucinnak 56 ml diklórmetánnal készült oldatát, és a szuszpenziót 20 percig rázzuk. 10) Megismételjük a (7), (1), (2), (3), (4) és (5) lépést. 11) Hozzáadjuk 2,2 g terc-butoxikarbonil-glutamin-p-nitrofenilészternek 8 ml dimetilformamid és 20 ml diklórmetán elegyével készült oldatát, és a szuszpenziót éjjelen át rázzuk. 12) 4 ízben diklórmetánnal mossuk, hozzáadjuk 1,46 g terc-butoxikarbonil-glutamin-p-nitrO-fenilészternek 8 ml dimetilformamid és 20 ml diklórmetán elegyével készült oldatát, és 5 óra hosszat rázzuk. Ezután a peptidgyantát 100 ml trifluorecetsavmn szuszpendáljuk. A szuszpenzión hidrogénbronidot buborékoltatunk át, miközben a lombikot eges vízzel hűtjük. 35 perc múlva a gyantát kiízűrjük, és 2 ízben trifluorecetsavval és 4 ízben ;rifluorecetsav és diklórmetán 1:1 arányú elegyesei mossuk. Az egyesített szüredókeket szárazra jepároljuk, és a maradékot éterrel digeráljuk. 1 kapott terméket szűrőn elválasztjuk, és megszárítva a szabad tetrapeptidet kapjuk. Aminosav-összetétele: Glu 1,0, Pro 2,1, Ileu 0,98. Papíriromatográfiai Rf

értéke: 0,50. o) Prolil-glutaminil-izoleucil-prolil-prolin A címben megnevezett vegyület az a) szakasz 1 — 12. lépései szerint készül. Ezután az N-termiaális prolilmaradékot a 6. és 7. lépésben leírt mólon bevisszük. A kapott peptidet elválasztjuk a gyantától, és az a) szakaszban leírt módon szabad pentapeptidet kapunk. Aminosav-összetétele: Glu 1,1, Pro 3,1, Ileu 0,90. Papírkromatográfiai Rf Srtéke: 0,65. c) Treonü-prolil-glutaminil-izoleticil-prolil-prolin l A címben megnevezett vegyületet a b) szakasz-: ban leírt módon állítjuk elő a peptid és a gyanta 5 elválasztásáig. Megismételjük az 1. —5. lépéseket,* és bevisszük az N-terminális treonilmaradékot a* tetrapeptidnek diklórmetánban terc-butiloxi-karbonil-O-benzil-treoninnal való kapcsolásával. A kapott peptidet elválasztjuk a gyantától, és az á)> 10 szakaszban leírt módon szabad hexapeptidként kapjuk. Aminosav-összetétele: Thr 0,95, Glu 0,98,í Pro 3,1, Ileu 0,90. Papírkromatográfiai Rf értéke; 0,67. 15 d) Prolü4reonű-prolű-gltrtaminü-izoleucü-pi>olil-prolin '• • •: A címben megnevezett vegyületet1

a c) szakasz-'

1 ban leírt módon állítjuk elő a peptidnek a gyantá-i 20 tói való elválasztásáig/ Ezután ai íí-terminális' prolilmaradékot bevisszük a 6. és 7. lépés'mégis* métléséVel. A keletkezett peptidet elválasztjuk agyantától, és így az a) szakaszban leírt módon aí szabad heptapeptidhez jutunk. Aminosáv-összeté* 25 tele: Thr 0,92, Glu 1,1, Pro 4,4, Ileu 0,89. Pápír-s. kromatográfiai Rf értéke: 0,70. " e) Arginű-prolű-treonű-prolü-glutaminil-izoteucil* -prolii-prolin 30 A címben megnevezett vegyületet a d) szakaszban leírt módon állítjuk elő a peptidnek a gyantától való elválasztásáig. Ezután bevisszük az N-terminális arginilmaradékot Na-terc-butiloxikar-» 35 bonü-nitroargininnel 1:1 arányú dimetilformamid-diklórmetán elegyben. A keletkezett peptidet elválasztjuk a gyantától, és az a) szakaszban leírt módon a szabad oktapeptidet kapjuk. Ezután az arginilmaradék nitro-védőcsoport ját hidrogénezés-40 sei eltávolítjuk. Aminosav-összetétele: Arg 0,92, Thr 0,95, Glu 1,0, Pro 4,2, Ileu 0,89. Papírkromatográfiai Rf értéke 0,56. f) Prolű-arginil-prolil-treonil-prolil-glvtaminil-izo-45 leucil-prolil-proliii A címben megnevezett vegyületet az e) szakaszban leírt módon állítjuk elő a peptidnek a gyantától való elválasztásáig. Ezután bevisszük az N-50 terminális prolilmaradékot a 6. és 7. lépés megismétlésével. A kapott peptidet elválasztjuk a gyantától, és az a) szakaszban leírt módon szabad noriapeptidként kapjuk. Az arginilmaradék nitro-védő* csoportját hidrogénezéssel távolít juk el. Aminosav-55 összetétele: Arg 0,93, Thr 0,95, Glu 1,0; Pro 5,5, Ileu 0,90. Papírkromatográfiai Rf értéke 0,62. g) Triptofü-prolű-arginil-prolil'tréonil-prolil-gl'utaminil-izoleucil-prolil-prolin 60 A címben megnevezett vegyületet az f) szakaszban leírt módon állítjuk elő a peptidnek a gyantától való elválasztásáig. Ezután bevisszük az N-terminális triptofilmaradékot 3,67 g terc-butoxi-65 karbonil-triptofánnak 15 ml dimetilformamid és 3