163708. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek előállítására 3-hidroxi-4-oxo-3,4-dihidro-1,2,3-benzotriazin jelenlétében
163708 9 c) H-Gly-Val-Cys(Trt)-Ser-Leu-OH 7,3 g Boc-Gly-Val-Cys(Trt)-Ser-Leu-OH-t szobahőmérsékleten vízmentes trifluorecetsavban oldunk. Az oldatot 30 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 25 C° fürdőhőmérsékleten vákuumban bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük és kiszűrjük. Az amorf terméket 6:4 arányú dioxán:víz elegyben oldjuk, és az oldathoz nátriumacetát-oldatot adunk. Az elegyet lehűtjük, a csapadékot kiszűrjük és vízzel mossuk. 6,75 g (86,6%) terméket kapunk, [a]o = — 25,6° (c=l, 90%-os ecetsavban). A termék vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat alapján nyomnyi ninhidrin-pozitív szennyezést tartalmaz. Elemzés C38 H 49 N 5 0 7 S.2Na-acetát.l/2H 2 0 képlet alapján (M = 894,99): számított: C=56,35%, H=6,31% N=7,83%, S = 3,58%, talált: C = 56,2 %, H = 6,4 %, N = 7,4 %, S = 3,3 %. Na: számított=5,14%, talált=4,6%. 5. példa Boc-Cys(Trt) -Cys(MPCH) -Ala-Gly-Val-Cys-(Trt)-Ser-Leu-OH előállítása a) Boc-Cys(Trt) -Cys(MPCH) -Ala-ONB 23,7 g (57,9 mmól) Boc-Cys(MPCH)-OH, 23,1 g (58,2 mmól) H-Ala-ONB-tozilát és 9,55 g (58,5 mmól) HOOBT 230 ml tetrahidrofuránnal készített szuszpenziójához 0 C°-on, keverés közben 7,5 ml (58,5 mmól) N-etilmorfolint, majd 5 perc elteltével, keverés közben 12,7 g (61,3 mmól) DCC kevés tetrahidrofuránnal készített oldatát adjuk. Az elegyet egy órán át 0 C°-on, majd 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük, a csapadékot kiszűrjük, és a szűrletet bepároljuk. A maradékot a 2a) példában leírt módon dolgozzuk fel. A kapott terméket etilacetátos oldatban bázikus Al2 0 3 -on (Woelm, I. aktivitási fok) kromatografáljuk. 31,9 g (89,5%) amorf terméket kapunk. A kapott 31,9 g (51,8 mmól) Boc-Cys-(MPCH)-Ala-ONB-t 100 ml jégecetben oldjuk. Az oldathoz 100 ml 1 n HCl/jégecet elegyet adunk, és 1 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az elegyet finom vákuumban bepároljuk, a maradékhoz étert adunk, és ismét bepároljuk. A maradékot éterrel többször eldörzsöljük, az étert minden esetben dekantálással elkülönítjük, végül finom vákuumban szárítjuk. 24,3 g (a Boc-Cys(MPCH)-Ala-ONB mennyiségére számított 85%) amorf, habos terméket kapunk. A kapott 24,3 g (44,1 mmól) H-Cys-(MPCH)-Ala-ONB.HCl-ot kevés tetrahidrofuránban oldjuk, és az oldatot 23,2 g (50 mmól) Boc-Cys-(Trt)-OH, 7,3 g (45 mmól) HOOBT és 9,3 g (45 mmól) DCC 100 ml tetrahidrofuránnal készített, előzetesen 0 C°-on, illetve szobahőmérsékleten 1001 órán át kevert oldatához adjuk. Az elegybe 5,8 ml (45 mmól) N-etilmorfolint csepegtetünk, és további 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A csapadékot kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk, és a maradékot a 2a) példában leírt módon feldolgozzuk. A szennyezett terméket etilacetátos oldat-10 ban bázikus Al 20 3 -on (Woelm, I. aktivitási fok) kromatografáljuk 40,9 g (a H-Cys(MPCH)-Ala-ONB.HC1 mennyiségére számított 96,4%) amorf, habos, vékonyrétegkromatográfiásan egységes ter-5 méket kapunk. A termék tapasztalati képlete: C53H 60 N 4 O 9 S 2 (M=961,2). b) Boc-Cys(Trt)-Cys(MPCH)-Ala-OH 40,9 g (42,5 mmól) Boc-Cys(Trt)-Cys(MPCH)-10 -Ala-ONB-t 125 ml dioxánban oldunk, az oldathoz keverés közben 25 ml vizet adunk, és timolftalein indikátor jelenlétében 43 ml 1 n NaOH oldattal titráljuk. Az elszappanosítás befejeződése után az elegyet 2 n citromsav-oldattal semlegesítjük és váku-15 umban bepároljuk. A maradékot 0 C°-on etilacetát és 2 n citromsav-oldat között megosztjuk. Az fetilacetátos oldatot 2 n citromsav-oldattal és vízzel mossuk, nátriumszulfát fölött szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A p-nitrobenzilalkohol eltávolítása 20 céljából a maradékot kevés éterben oldjuk, és az oldathoz nagyobb mennyiségű petrolétert adunk. A kivált olajat dekantálással gyorsan elkülönítjük. Ezt az eljárást még kétszer megismételjük. A második átcsapás után 22,6 g (64,4%) amorf, poralakú, 25 vékonyrétegkromatográfiásan egységes terméket kapunk. A termék tapasztalati képlete: C46 H 55 N 3 0 7 -S2 (M = 826,1). c) Boc-Cys(Trt)-Cys(MPCH)-Ala-Gly-Val-30 -Cys(Trt)-Ser-Leu-OH 6,98 g (8,45 mmól) Boc-Cys(Trt)-Cys(MPCH)-Ala-OH és 1,15 g (8,45 mmól) HOOBT 30 ml dimetilformamiddal készített oldatához 0 C°-on 1,75 g (8,45 mmól) DCC 0 C°-ra hűtött, kevés dimetil-35 formamiddal készített oldatát adjuk. Az elegyet 1 órán át 0 C°-on, majd 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük, és ezután 5,8 g (6,5 mmól) H-Gly-Val-Cys(Trt)-Ser-Leu.2Na-acetát.l/2H2 0-t adunk hozzá. Az elegyet 1 órán át szobahőmérsékleten kever-40 jük, a csapadékot kiszűrjük, a szűrletet finom vákuumban bepároljuk, és a maradékot éterrel eldörzsöljük. A kapott amorf port kiszűrjük és jégecet— víz elegyből átcsapjuk. 9,8 g (97,7%) vékonyrétegkromatográfiásan egységes, azonban nem éles ol-45 vadáspontú terméket kapunk, [a]i,2 = —14,3° (c=2, dimetilformamidban). Elemzés CM H 102 N 8 Oi 3 S 3 .H 2 O képlet alapján (M = 1546): 50 számított: C=65,27%, H=6,78%, N=7,24%, S=6,23%, talált: C=65,l %, H=6,9 %, N=7,l %, S=6,6 %. 55 6. példa Z-Val-GlufOBu'J-GlnfMbhj-OMe előállítása a) Z-Glu(OBit)-Gln(Mbh)-OMe 60 20—20 ml dimetilformamidban 5,2 g (10 mmól) Z-Glu(OBu')-OH.DCHA-t, illetve 4,25 g (10 mmól) H-Gln(Mbh)-OMe.HCl-t oldunk, és az oldatokat egyesítjük. Az elegyet lehűtjük, a kivált csapadékot kiszűrjük, és a szűrlethez 1,65 g (10 mmól) HOOBT-t 65 adunk. Az oldathoz 0 C°-on 2,2 g DCC dimetilform-5
