163599. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiailag aktív hexa -, hepta és oktapeptidek előállítására
13 163599 14 -Gly-OH-t állítunk elő, R f = 0,22 (4:0, 75:0,25:1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz-elegyben). Hozam: 60%. Boc-Gly-Met-Glu-(OtBu)-N2 H 3 -ból (lásd: A.8. példa) és H-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH-ból (lásd: E. példa) H-Gly-Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH-t állítunk elő, Rf=0,23 (4:0,75:0,25:1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben). Hozam: 68%. 3. példa 3.1. H-Ser-Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH és a megfelelő CM H 33 -észter előállítása Az 1. példában ismertetett eljárással Boc-Ser-Met-Glu-(OtBu)-N2 H 3 -ból (lásd: A.6. példa) előállítjuk a megfelelő oktapeptidet. Kromatográfiás vizsgálat alapján a kiindulási anyagok kapcsolási reakciója 1 hetet vesz igénybe. A reakcióelegyet pH=6—7 értékű vizes ecetsavoldatba öntjük, és a kivált csapadékot 9:1 arányú dimetilformamid-víz eleggyel mossuk. A kapott oktapeptid-származékot további tisztítás céljából 9:1 arányú metanol-víz eleggyel mossuk. 215 C°-on bomlás közben olvadó terméket kapunk, [OC]D = -62,8° dimetilformamidban. Aminosavelemzés eredménye: Ser=0,94, Glu=0,94, His = 1,01, Arg =1,02, Phe=l,05, Gly=l,00. Hozam: 65%. A védőcsoportot az 1. példában leírt módon lehasítjuk. A 95%-os hozammal kapott szabad oktapeptidet aminosav-elemzéssel azonosítjuk. Rf =0,26 (4:0,75:0,25:1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben). Boc-Ser-Met-Glu-(OtBu)-N3 (lásd: A.6. példa) és H-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OC16 H 33 (lásd: E. példa) kondenzációjával védett oktapeptid-származékot állítunk elő, majd a védőcsoportokat 90%-os trifluoracetáttal lehasítjuk. A kapott H-Ser-Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-0-C16 H 33 -at az 1. példában leírt eljárással acetáttá alakítjuk. Hozam: 58%. Aminosav-elemzés: Ser=0,94, Met=0,90, Gly= =0,98, His=1,02, Arg=0,97, Gly=l,00, Rf=0,32 (4:0,75:0,25:1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben). Infravörös spektrum; 1736cm-1 -nél jellemző maximum. Hasonló módon állítjuk elő Boc-Met-Glu-(OtBu)-N2 H 3 (lásd: A.l. példa) és H-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Ő-C16 H 33 (lásd: E. példa) kondenzációjával, majd a védőcsoportok 90%-os trifluoracetáttal végzett lehasításával a H-Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-0-C16 H 33 -at. Rf=0,36 (4:0,75:0,25:1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben). A Stein— Mohr módszerrel végzett aminosav-elemzés megfelelő eredményt ad. Hasonló módon Boc-D-Met-Glu-(OtBu)-N2 H 3 (lásd: A.2. példa) és H-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-0-C16 H 33 (lásd: E. példa) kondenzálásával, majd a védőcsoportok 90%-os trifluoracetáttal végzett lehasításával H-D-Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-0-C16H 33 -at állítunk elő. R f =0,38 (4:0,75:0,25:1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben). A Stein—Mohr módszerrel végzett aminosav-elemzés megfelelő eredményt ad. 4. példa H-Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-OH előállítása 4 mmol Boc-Met-Glu-(OtBu)-N2 H 3 -at (lásd: A. 1, 5 példa) az 1. példa A) lépésében leírt módon aziddá alakítunk. A kapott terméket 2,57 g H-His-D-Phe-Arg-Trp-OH (lásd: E. példa) 15 ml dimetilformamiddal és 1,68 ml trietilaminnal készített oldatához adjuk. A reakcióelegyet 96 órán át 0 C°-on állni 10 hagyjuk, majd a rózsaszín oldatot pH = 5 értékű vizes ecetsavoldatba öntjük. A kivált csapadékot kiszűrjük és szárítjuk. A védett hexapeptid Rf értéke 0,65 (4:0,75:0,25:1 arányú butanol-pridin-ecetsav-víz elegyben.) Hozam (hidrazidra számítva) 69%. 15 A kapott hexapeptid-származékot a korábbiakban leírt módon trifluorecetsavval kezeljük, majd a reakcióelegyet vákuumban szárazra pároljuk. A peptid trifluoracetát-származékát 1:1 arányú terc-butanol-víz elegyben Dowex ioncserélő gyantával 20 kezeljük, és így a trifluoracetát-csoportokat az 1. példa B) lépésében leírt módon acetát-csoportokra cseréljük. A kapott oldatot liofilizáljuk, és a terméket szárítjuk. A termék Rf értéke 0,24 (4:0,75:0,25: : 1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben). 25 Hozam 92%. Hasonló módon állítjuk elő az alábbi peptideket: (hozam: 60—70%) 30 Peptid R; Kiindulási anyag (példa) H-D-Met-Glu-His-D--Phe-Arg-Trp-OH++ 0,21 A.2. +E. H-Ser-Met-Glu-His-D-35 -Phe-Arg-Trp-OH 0,19 A.6. +E. H-D-Ser-Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-OH++ 0,20 A.7. +E. H-Gly-Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-OH 0,23 A.8. +E. 40 + 4:0,75:0,25:1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben mért érték + + a termék és leucin-ammopeptizád reakciója során nem lép fel bomlás (hidrolízis) 45 5. példa H-Met-Glu-His-D-Phe-Lys-Trp-OMe előállítása 2,92 g H-His-D-Phe-(Boc)-Lys-Trp-OMe. HCl 50 (lásd: F. példa) 12 ml dimetilformamiddal és 1,68 ml trimetilaminnal készített oldatához 4,4 mól, a 4. példában előállított azidot adunk. A reakcióelegyet 65 órán át állni hagyjuk, majd sziruppá betöményítjük, és a kapott szirupot 9:1 arányú etilacetát-víz 55 elegyben oldjuk. Az etilacetátos oldatot 5%-os citromsavoldattal, vízzel, nátriumhidrogénkarbonátoldattal, majd ismét vízzel mossuk, és vákuumban bepároljuk. A kapott védett hexapeptid-észtert szárítjuk. 137—141 C°-on olvadó terméket kapunk, 60 Rf =0,75 (8:2 arányú benzol-etanol elegyben). A kapott hexapeptidésztert trifluorecetsavval kezeljük, majd a trifluorecetsav-csoportokat a korábban leírt módon ecetsavcsoportokra cseréljük. A termék Rf értéke 0,42 (4:0,75:0,25:1 arányú butanol-65 -piridin-ecetsav-víz elegyben). 7
