163599. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiailag aktív hexa -, hepta és oktapeptidek előállítására
163599 11 12 Peptid R? WD (C) His Phe Arg Gly H-His-D-Phe-Arg-Trp-OH H-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH H-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-+ (4:0, 75:0, 25:1 arányú [butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben) 0,25 0,22 —16°n HCl —15°n HCl (1) (1) 1,00 0,95 0,95 1,01 1,03 1,02 1,00 0,33 —18°n HCl (0,5) 0,95 1,01 0,99 1,00 F. példa His-D-Phe- (Boc) -Lys-Trp-OMe előállítása 10 1. Z-(Boc)-Lys-Trp-OMe előállítása 150 ml metilénkloridban 11,6 g (46 mmol) H-Trp-OMe.HCl-t szuszpendálunk. A szuszpenziót 15 0C°-ra hűtjük, majd a szuszpenzióba fél órán át ammóniagázt buborékoltatunk. Az elegyet szűrjük, a szűrletet vákuumban, 40 C°-os fürdőhőmérsékleten szárazra pároljuk, és a maradékot 17,6 g Z-(Boc) Lys-OH 150 ml metilénkloriddal készített oldata- 20 ban felvesszük. Az elegyet 0C°-ra hűtjük, 9,5 g diciklohexilkarboidimidet adunk hozzá, és 65 órán át 0C°-on keverjük. Az elegyhez 150 ml etilacetátot adunk, szűrjük, és a szűrletet 0,1 n sósavoldattal, vízzel, 5%-os nártiumhidrogénkarbonát-oldat- 25 tal, majd ismét vízzel mossuk. A szerves réteget szárazra pároljuk, és a maradékot forrásban levő benzolból átkristályosítjuk. 114—122 C°-on olvadó terméket kapunk, [a]o = —30° (c—1, metanolban), Rf=0,83 (8:2 arányú benzol-etanol elegyben). 30 A kapott terméket 1 mól-ekvivalens sósav jelenlétében, metanolban, 10%-os palládium/csontszén katalizátor felhasználásával hidrogénezzük. A megfelelő dipeptidészter-hidrokloridhoz jutunk. Rf (5:3: :2 arányú amilalkohol-piridin-víz elegyben) =0,71. 35 2. Z-His-D-Phe-(Boc)-Lys-Trp-OMe előállítása 10 mmól Z-His-D-Phe-N2 H 3 -ból a fent leírt eljárással azid-vegyületet állítunk elő. A kapott terméket 8,3 mmól H-(Boc)-Lys-Trp-OMe. HCl 20 ml dimetilformamiddal és 4 ml trietilaminnal készített 40 oldatához adjuk, és az elegyet 70 órán át 0 C°-on állni hagyjuk. A reakcióelegyet vákuumban szárazra pároljuk, és az olajos maradékot vizes etilacetátban felvesszük. Az etilacetátos oldatot 5%-os citromsavoldattal, vízzel 5%-os, nátriumhidrogénkarbonát- 45 oldattal, majd ismét vízzel mossuk, az oldószert 40 C°-os fürdőhőmérsékleten lepároljuk, és a maradékot 40:60 arányú etilacetát-petroléter elegyből kristályosítjuk. 185—190C°-on olvadó terméket kapunk, [a]{?=-14° (c=l, metanolban), Rf =0,70 50 (9:1 arányú benzol-etanol elegyben). 3. A kapott terméket 1 mól-ekvivalens sósav jelenlétében, metanolban, palládium/csontszén katalizátor felhasználásával hidrogénezzük. A megfelelő tetrapeptidészter-hidrokloridhoz jutunk. Rf =0,42 55 (4:1:1 arányú butanol-ecetsav-víz elegyben). /. példa H-Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH és hidrokloridja 60 A) Boc-Met-Glu-(OtBu)-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH 1,97 g (4 mmól) Boc-Met-Glu-(OtBu)-M2H3 -at (az A.l. példában előállított termék) 10 ml dimetilformamidban oldunk. Az oldatot 0C°-ra hűtjük, 65 majd 8 mól-ekvivalens sósavat tartalmazó, frissen készített sósavas tetrahidrofurán-oldattal elegyítjük. A kapott oldatot — 20 C°-ra hűtjük, majd 0,6 ml (4,4 mmól) izoamilnitritet adunk hozzá. Az oldatot 5 percig keverjük, majd 2,8 g His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH (az É. példában előállított termék) 15 ml dimetilformamiddal készített oldatához adjuk. Az elegyet —20 C°-ra hűtjük, majd 1,68 ml trietilamint adunk hozzá. Az elegyet 96 órán át állni hagyjuk, pH=6—7 értékű vizes ecetsavoldatba öntjük, a kivált csapadékot 1:10 arányú dimetilformamid-víz eleggyel mossuk és elkülönítjük. 210 C°-on bomlás közben olvadó terméket kapunk. Hozam: 70%. Rf =0,72 (4:0,75:0,25:1 arányú butanol-piridinecetsav-víz elegyben). Kén-reakció: pozitív; Paulyreakció (hisztidinre): pozitív; Ehrlich-reakció (triptofánra): pozitív. Hozam: 70%. B) A védőcsoportok lehasítása A fenti lépésben kapott heptapeptidet 90%-os vizes trifluor-ecetsav-oldatban oldjuk (2 ml oldószerben 100 mg peptidet oldunk). A rózsaszín oldatot fél órán át állni hagyjuk, majd 20 C°-os fürdőhőmérsékleten vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot éjszakán át szilárd káliumhidroxid fölött szárítjuk. A kapott habos maradékot 1:1 arányú víz-terc-butanol elegyben oldjuk, majd részletekben Dowex ioncserélő gyantával kezeljük, és így a trifluorecetsavat ecetsavra cseréljük. A kapott vizes oldatot liofllizáljuk. Körülbelül 2 mól ecetsavat tartalmazó liofilizált peptidet kapunk. Rf =0,24 (4:0,75:0,25:1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben). Aminosavelemzés: His=0,90, Arg = 1,02, Glu=1,06, Gly=1,08, Met= =0,9, Phe=l,04, Hozam: 92%. A fenti módon kapott peptid vizes szuszpenziójához 2 mól-ekvivalens sósavat adunk, majd az elegyet liofllizáljuk, és a sósavas sót elkülönítjük. Rt =0,24 (4:0,75:0,25:1 arányú butanol-piridinecetsav-víz elegyben). 2. példa Az 1. példában leírt eljárással az alábbi termékeket állítjuk elő: (hozamok a kiinduló hidrazidra számítva): Boc-D-Met-Glu-(OtBu)-N2 H 3 -ból (lásd: A. 2. példa) és H-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH-ból (lásd: E. példa) H-D-Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH-HCL-t állítunk elő, Rf=0,26. (4:0,75:0,25:1 arányú butanol-piridin-ecetsav-víz elegyben). Hozam: 63%. Boc-D-Ser-Met-Flu-(OtBu)-N2 H 3 -ból (lásd: A.7. példa) és H-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH-ból (lásd: E. példa) H-D-Ser-Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-6
