163599. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszichofarmakológiailag aktív hexa -, hepta és oktapeptidek előállítására
163599 9 B. példa Ditritil-His-D-Plie-Arg-Trp-OH előállítása 1. 8 g (10 mmol) ditritil-His-D-Phe-N2H 3 -at 35 ml tisztított dimetilformamidban oldunk. Az oldatot -20 C°-ra hűtjük, majd 2 mól-ekvivalens sósav frissen készített, tetrahidrofurános oldatát adjuk az elegyhez. (A tetrahidrofurános sósavoldatot sósavgáz-bevezetéssel állítjuk eló'.) A kapott elegyet —20 C°-ra hűtjük, 1,48 ml izoamilnitritet (11 mmól) adunk hozzá, és az oldatot —20 C° alatti hőmérsékleten 5 percig keverjük. 3,7 g (8,3 mmól) H-Arg-Trp-OMe.2HCl-t 20 ml dimetilformamidban oldunk, az oldatot lehűtjük, és 4 ml trietilamint adunk hozzá. A kapott oldatot á fenti lépésben előállított eleggyel elegyítjük, majd a reakcióelegyet 72 órán át 0 C°-on tartjuk. A színes oldatot vákuumban szárazra pároljuk, majd a maradékot vizes etilacetátban felvesszük, és az etilacetátos oldatot kevés 2 n ecetsavoldattal, vízzel, 5 %-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, majd ismét vízzel mossuk. Az elegyet nátriumszulfát fölött szárítjuk, az etilacetátot vákuumban lepároljuk, és a maradékot metanol-éter elegyből átkristályosítjuk. 202—210 C°-on bomlás közben olvadó terméket kapunk, [adj? =-39,8° (c=l, metanolban), Rf =0,82 (8:2 arányú benzol-etanol elegyben). 2. A fenti lépésben kapott tetrapeptid elszappanosítása 2,3 g fenti módon kapott tetrapeptid-hidrokloridot 17,5 ml metanol és 2,5 ml víz elegyében oldunk, és az elegyhez 4 C°-on 2,3 ml ugyancsak 4 C°-ra hűtött 4 n nátriumhidroxid-oldatot adunk. A lúgos oldatot 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd 4 C°-ra hűtjük, és 100 ml, ugyancsak 4 C°-os 1 n ecetsavoldatba csepegtetjük. A becsepegtetést gyorsan, és keverés közben végezzük. A reakcióelegyet 1 órán át 0 C°-on állni hagyjuk, majd a kivált tetrapeptidet kiszűrjük. 225—234C°-on bomlás közben olvadó ditritil-His-D-Phe-Arg-Trp-OH -t kapunk, [a]o = -39,l0 (c=l, metanolban), R f = =0,27 (8:2 arányú benzol-etanol elegyben). C. példa Ditritil-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH előállítása 1. Ditritil-His-D-Phe-Arg-Trp-hidrazid.HCl előállítása 4,6 g, a B. példa 1. lépése szerint előállított észtert 30 ml metanolban oldunk, és az oldathoz 1 ml hidrazinhidrátot adunk. Az elegyet 20 órán át 20 C°-on, majd 1 órán át 0 C°-on tartjuk, a nyers terméket kiszűrjük, és meleg metanolból átkristályosítjuk. 253 C°-on bomlás közben olvadó hidrazid-vegyületet kapunk, [<x$3 =—44° (c=l, dimetilformamidban), Rf =0,4 (5:3:2 arányú amilalkohol-piridin-víz elegyben). 2. Ditritil-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH.HCl előállítása 2,24 g (2 mmól) fenti módon kapott hidrazidot melegítés közben oldunk, majd az oldatot —20 C°-ra hűtjük. Az oldathoz 4 mmól HCl tetrahidrofurános oldatát, és 0,3 ml (22 mmól) izoamilnitritet adunk, 10 és az elegyet 5 percig — 20 C°-on keverjük. A kapott oldatot 300 mg (4 mmól) glicin és 1,12 ml (8 mmól) trietilamin 10 ml dimetilformamiddal készített, ugyancsak —20 C°-os oldatához adjuk. A kapott 5 oldatot 0 C°-on keverjük, majd 300 ml vizes ecetsav-oldatba öntjük. Bomlás közben 210 C°-on olvadó pentapeptid válik ki, [<X]D = —35,3° (c=l, dimetilformamidban), Rf =0,24 (2:8 arányú etanol-benzol elegyben). D. példa Ditritil-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-0-Cu H 88 előállítása ^ 15 1. H-Gly-0-C„ Hsa előállítása 4,8 ml hexadecilalkoholból előállított hexadecilalkohol-szulfitészter és 2,4 ml tisztított tionilklorid elegyéhez -10 C°-on 2,09 g (10 mmól) Z-Gly-OH-t 20 adunk. Az elegyet 4 napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ekkor — kromatográfiás vizsgálat alapján — a sav főtömege átalakult. A tionilkloridot lepároljuk, majd az elegyet jégre öntjük. A kivált olajat etilacetátban felvesszük. Az oldatot 5 %-os 25 nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, magnéziumszulfát fölött szárítjuk, és az etilacetátot lepároljuk. A kapott olajos maradékot — amely karbobenzoxiglicint már nem tartalmaz, de még hexadecilalkohollal szennyezett — kromatográfiás 30 úton tisztítjuk. 6,4 g, nem kristályosítható észtert kapunk. A védett észtert vizes sósavoldatban hidrogénezzük. Glicinészter-hidrokloridot kapunk. A termék liofilizálás és vizes metanolból végzett átkristályosí-35 tás után 235—240C°-on olvad. Rf =0,50 (5:3:2 arányú amilalkohol-piridin-víz elegyben). 2. 2 mmól Ditritil-His-D-Phe-Arg-Trp-N2 H 3 . HCl-t a fent ismertetett módon aziddá alakítunk, és a kapott terméket 0,67 g (2 mmól) H-Gly-O-40 -C16 H 33 .HC1 20 ml dimetilformamiddal és 0,84 ml trietilaminnal készített, —20 C°-os oldatához adjuk. A reakcióelegyet 96 órán át 0 C°-on állni hagyjuk, majd 500 ml vizes ecetsavoldatba öntjük. Két nap elteltével a kivált pentapeptidet elkülönítjük. 45 Amorf terméket kapunk, Rf =0,71 (5:3:2 arányú amilalkohol-piridin-víz elegyben), [«]£?——32° (c= =0,5, dimetilformamidban). *" E. példa A B., C, ill. D. példák 2. lépéseiben előállított tetra- és pentapeptidek tritil-csoportjainak lehasítása 55 1 mmól védett peptidet 5 ml ecetsavban oldunk vagy szuszpendálunk, és az elegyet 10 percig gőzfürdőn melegítjük. Az oldatot vagy szuszpenziót lehűtjük, 100 ml éterbe öntjük, a kivált csapadékot vízben oldjuk, és a sav eltávolítása érdekében 60 Amberlite IRA 410~ ioncserélő gyantával kezeljük az oldatot. Az elegyet szűrjük, és a szűrletet liofilizáljuk. A hexadecilészter-peptidet hidrokloridjává alakítjuk. A kapott termékek fizikai állandóit és a Stein és Mohr módszerével végzett aminosav-elem-65 zés adatait a következő táblázatban közöljük. 3
