163588. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A 7béta- (D-5-amino-5-karboxi-valeramido) -3-(karbamoiloximetil)-7-metoxi-CEF-3-AM-4-karbonsav antibiotikum előállítására

163588 11 az e konkrét leírásnak mindenben megfelelő mikroorganizmus-törzs alkalmazására korlátozva, hanem kiterjed más olyan mikroorganizmusoknak, pl. természeti lelőhelyekről elkülönített vagy mutáció útján (természetes mutánsok szelekciójával vagy mesterséges mutagen hatások, mint röntgensugár, ibolyántúli besugárzás, nitrogén-mustárok stb. segítségével) kapott Actinomyces-törzseknek a felhasználására is, amelyek megfelelő tenyésztési körülmények között a 842A antibiotikum termelésére képesek. A 842 A antibiotikum hatásosságának in vitro vizsgálata: A 842A antibiotikum in vitro biológiai jellemzését ágárlemezen, a korong-diffúziós módszerrel történő vizsgálat alapján végeztük. A vizsgálatokat olymódon folytattuk le, hogy Petri-csészékbe 5 ml 0,2% élesztőkivonat-tartalmú „Difco" ágáros táp-VI. láblázat Rezisztencia-vizsgálatok a 842A antibiotikummal (in vitro) Vizsgálati körülmények Gátlás zóna átmérője mm Escherichia coli törzsek = 6 ;0 -ni Xi 3 Sb < n £ 00 > Ö »-9. •^ ~w T3 O üs •gl Szenzitív törzs 5 25 16 20 18 Sztreptomicinrezisztens törzs 5 25 14 19 16 Sztreptotricinrezisztens törzs 10 25 13 14 18 Oxamicin-rezisztens törzs 10 25 13 13 17 Pleocidin-rezisztens törzs 10 37 15 18 17 Klóramfenikol-rezisztens törzs 10 25 13 17 16 Klórtetraciklinrezisztens törzs 10 25 21 20 23 Oxitetraciklinrezisztens törzs 10 25 20 23 24 Neomicin-rezisztens 10 37 18 17 17 Tetraciklinrezisztens törzs 10 25 16 20 20 Viomicin-rezisztens törzs 10 37 15 16 30 Polimixin-rezisztens 10 25 23 21 7 Grizein-rezisztens 5 25 18 21 16 Megjegyzés: A kísérleteket az Escherichia coli törzseinek oly sorozatával végeztük, amelyeket ugyanabból a szenzitív E. coli kultúrából különítettünk el, majd az egyes elkülönített kultúrákat a megadott antibiotikumok hatásának való kitétel útján tettük rezisztenssé az illető antibiotikummal szemben. Minthogy a korongok átmérője 7 mm volt, a 7 mm-es gátlási zóna-átmérő azt jelenti, hogy gátlás nem volt. 12 közeget öntöttünk, majd az így képezett ágárlemez felületét beoltottuk a kísérleti mikroorganizmus szabványos sejt-szuszpenziójával (amelynek 660 millimikronnál mért optikai sűrűsége 0,22 volt), 5 5 vagy 10 ml inokulumot alkalmazva 150 ml tápközegre, azután az antibiotikum oldatával megnedvesített, 7 mm átmérőjű korongokat helyeztünk a beoltott ágárlemez felületére és 25 C° vagy 37 C° hőmérsékleten 16 óra hosszat inkubáltuk a kultú-10 rát. E vizsgálatok módszerét és elveit a „Cross Resistance Studies and Antibiotic Idenfication" c. közelmény (Applied Microbiology, 6, 392—398, 1958) ismerteti. A vizsgálatoknak 810A antibiotikum hatás-spektrumára vonatkozó eredményeit, 15 valamint a rezisztencia-vizsgálatok eredményeit, a felhasznált mikroorganizmusok és kísérleti körülmények megadásával, az alábbi táblázatokban foglaltuk össze. 20 VII. táblázat A 842A antibiotikum hatás-spektruma különleges adalékok esetén (in vitro) Vizsgálati körülmények Gátlás zóna átmérője mm Escherichia W-MB-60 törzs (az alábbi különleges adalékokkal) se ;0 •C3 3 -So < Z £ >> B 2 oo •3 "8 KJ ys •si Iff •E E Z2 Kontroll (adalék nélkül) 0,1 M foszfát-puffer, pH = 5 5 5 25 25 16 19 20 20 18 15 0,1 M foszfát-puffer, pH = 7 5 25 22 29 25 0,1 M foszfát-puffer, pH = 9 5 25 21 22 24 20% emberi vérplazma 5 25 17 22 21 Kationcserélő gyanta (Dow ET 91—1%) 5 25 20 21 18 Megjegyzés: Kationcserélő gyantát tartalmazó le-45 mezben az agár koncentrációját 1 %-ra csökkentettük. A 842A antibiotikum hatása in vivo A 842A antibiotikum egéren szubkután beadás 50 esetén általában nagyobb aktivitást mutat, mint a cefalotin; hatása kb. megegyezik a cefaloridin, az ampicillin és a klóramfenikol hatásával, a Gramnegatív mikroorganizmusok általi fertőzések elleni védelem szempontjából. Igen előnyös tulajdonsága, 55 hogy nem toxikus és a szervezetből a vizelettel igen hamar kiválasztásra kerül; a szubkután injekcióban beadott 842A antibiotikum mennyiségének kb. 79%-a 4 órán belül kiválasztásra kerül. Az in vivo kísérletekben a 8842A antibiotikum 60 hatásosnak mutatkozott a Proteus három fajtája, a Salmonella két fajtája, az Escherichia coli egy törzse, a Klebsiella két törzse, valamint a Paracolobactrum arizoniae, Aerobacter aerogenes. Pasteurella multocida és Diplococcus pneumoniae E400 65 általi fertőzésekkel szemben. 6