163554. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyászati hatóanyag izolálására cabucala madagascariensis-ből

163554 4 ismételjük abból a célból, hogy a halogénezett szénhidrogénes oldatból az összes vízoldható alkatrészeket extraháljuk. Az egyesített vizes kivonatokat végül valamely kis molekulasúlyú karbonsav egy észterével, mint hangyasav-metilészterrel, hangyasav-etilészterrel, ecetsavmetilészterrel, ecetsav-n-butilészterrel, előnyösen etilacetáttal mossuk abból a célból, hogy a nem kívánatos kísérőanyagokat eltávolítsuk. A mosott vizes kivonatot előnyösen fagyasztószárítással megszárítjuk. Ezzel a módszerrel a hatóanyagot barnássárga por alakjában kapjuk. A találmány oltalmi köre kiterjed az izolált hatóanyagra is. A hatóanyag papírkromatográfiás meghatározás alapján egységes, Rf-értéke 2 tétfogatrész n-butanolból, 1 térfogatrész dimetilformafnidból és 1 térfogatrész vízből álló rendszerben 0,8SL A folt a következő reakciókat mutatja: Dragendorff-reagens: narancssárga, kálium-hexajodoplatinát: ibolyáskék, vas (III)-klorid: mélykék, antimon (IH)-klorid: halványkék, ninhidrin: sötétkárminvörös. A hatóanyag nehezen kristályosodik és 87 °C-on olvad. Kristályos pikrátot képez, amely 235—240 °C-on bomlás közben megolvad. Elemzési adatok: C: 57,7%, H: 7,0%, N: 4,9%, 0: 24,4%, Cl: 5,2%. A tömegspektrum alapján a hatóanyag molekulasúlya 780 és 800 között van. A hatóanyag UV-spektrumában 210 és 410 m/i tartományban abszorpciós sáv nem mutatható ki. A fajlagos forgatóképesség, (a) ß vízben = -20°. Az IR spektrumot a csatolt ábrán mutatjuk be. A hatóanyag különösen vízben oldódik jól, azonban más poláros oldószerekbén is, mint a piridinben, dimetilformamidban, dimetilszulfoxidban, valamint etanolban, savakban és metilénkloridban. A találmány szerinti hatóanyag ekvivalens mennyiségű fiziológiailag elfogadható savakkal sókká alakítható át. Ilyen savakként a szerves savak, mint az ecetsav, tejsav, borkősav és a szervetlen savak, mint a sósav és a foszforsav jön számításba. A találmány szerint készült új hatóanyag igen jó vérnyomáscsökkentő hatásával tűnik ki. A perifériában értágulást hoz létre, központilag a szívnyomást csökkenti. Rendszerint a szívfrekvencia is csökken. Magasvérnyomású kutyákon végzett kísérletekben a következő eredményekhez jutottunk: 1 kg testsúlyra számítva intravénásán adott injekcióban 0,25 mg hatóanyag 20 perc leforgása alatt 125/85 Mgmm vérnyomást 105/65 Hgmm-re csökkent, amely 1 óra alatt még nem egyenlítődik ki. Ezzel egyidejűleg 50 perc leforgása alatt a szívfrekvencia percenkénti 189 ütésről 167-re csökken. Ezenkívül 50 perc eltelte után a bal oldali szívkamra nyomásemelkedési meredekségében egy fokozatos süllyedés következik be 2600 Hgmm-ről 1900 Hgmm-re. A légzési frekvenciát a hatóanyag nem befolyásolja. Ha í kg testsúlyra számítva 2 kg hatóanyagot 5 ml vizes oldat alakjában 10 perc leforgása alatt kutyáknak intravénás infúzió alakjában beadunk, akkor 170/140 Hgmm-ről 135/110 Hgmm-re való vérnyomáscsökkenés következik be. amely csak 185 perc eltelte után egyenlítődik ki. A szívfrekvencía 10 perc leforgása alatt a percenkénti 179 ütésről 158-ra csökken. Itt is 185 perc eltelte után következik be a kiegyenlítődés. A bal oldali szívkamra nyomás-emelkedési meredeksége másodpercenként 5200-ról 3200 Hgmm-re csökken és még 185 perc eltelte után is másodpercenként 4400 Hgmm. A koszorúérüreg vérrel való ellátottsága 2 perc leforgása alatt 134 ml-ről percenként 146 ml-re növekszik és 20 perc eltelte után kiegyenlítődik. A lábak vérellátottsága 10 perc eltelte után a percenkénti 16 ml-ről 41 ml-re növekszik és 30 perc eltelte után kiegyenlítődik. A hatóanyag vérnyomáscsökkentő hatást fejt ki patkányokon is, amelyeknél operációval mindkét veseartériát beszűkítettük és így mesterségesen magas vérnyomást hoztunk létre. Szubkután adott napi 10 mg/l kg testsúly dózissal 3 napon keresztül a vérnyomás 168 Hgmm-ről 122 Hgmm-re csökken és még 3 napig ezen az értéken marad. A fehér egéren vizsgált toxicitás mértéke 1 kg testsúlyra számítva 12-15 mg hatóanyag. Az új hatóanyag és fiziológiailag elfogadható savakkal képzett sói vérnyomáscsökkentő hatásuk folytán szív- és vérkeringési megbetegedések, pl. krónikus magas vérnyomás, szívelégtelenség, angina pectoris és perifériás vérellátottsági (vérkeringési) zavarok kezelésére alkalmazhatók. Az adagolás perorálisan vagy intravénásán történhet, mimellett az adag nagysága a betegség mértékétől és a beteg testsúlyától függően napi 1 és 50 mg között ingadozhat. Perorális beadásra főként tabletták vagy drazsék jönnek számításba, amelyek a hatóanyagot vagy annak sóit egy adagra számítva 1-50 mg dózisban tartalmazzák a szokásos segédanyagok és vivőanyagok, mint talkum, keményítő, tejcukor stb. kíséretében. Intravénás adagolás esetén előnyösen a hatóanyagnak vagy annak sóinak vizes oldatát alkalmazzuk. A következő előállítási példák szemléltetik az új hatóanyag kinyerését a Cabucala madagascariensisből. A kinyerési lehetőségeket azonban nem korlátozzuk a felsorolt példákra. 1. példa 7,4 kg Cabucala madagascariensis őrölt ágakat és szárat 30 liter petroléterrel Soxhlet-extrakciós berendezésben kezeljük és így a növényi zsíroktól, viaszoktól és szterinektől mentesítjük. Ezután a növényi részeket ugyanabban az extraktorban 60 liter kloroformmal kimerítő módon extraháljuk. Az ibolyaszínű barnás kloroformos oldatot leszűrjük és csökkentett nyomáson 500 ml térfogatra bepároljuk. A bepárolt oldatot 3X200-200 ml vízzel kirázzuk. A vizes fázisoknak a kloroformos fázistól való elválasztása után az egyesített vizes kivonatokat még 3X100-100 ml etilacetáttal mossuk. A mosott vizes kivonatot végül fagyasztó szárításnak vetjük alá. Ily módon papírkromatográfiai szempontból egységes sárgásbarna por alakú termékhez jutunk. A hozam 9,6 g, a kapott termék tulajdonságai megegyeznek a leíró részben ismertetett tulajdonságokkal. 2. példa 8,3 kg Cabucala madagascariensis őrölt gyökeret az 1. példa szerinti módon zsírtalanítunk, majd 60 liter metilénkloriddal kimerítő módon extrahálunk. Az így kapott vörösesbarna metilénkloridos oldatot 1 literre 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60