163454. lajstromszámú szabadalom • Eljárás prosztaglandin-E2- előállítására
17 163454 18 2 cm hosszú mintáját egy kis edényben a minta megnedvesítéséhez elegendő mennyiségi vízzel megnedvesítjük, majd az edényt lezárva, 6—24 óra hosszat állni hagyjuk. Ezután 1 ml metanolt adunk hozzá és a mintát vagy 2 óra hosszat rázzuk 25 °C körüli hőmérsékleten, vagy pedig 16—24 óra hosszat állni hagyjuk 10 °C hőmérsékleten. Ezután a folyadék kis mintáját (10—21 A) egy vékonyréteg-kromatográfiai lemezre visszük. Erre a célra előnyösen egy fluoreszcens kezelésben részesített szilikagél-lemezt alkalmazunk (ilyen pl. az Uniplate Silica Gel GF, Analtech, Inc Newark). Vonatkoztatási mintaként a PGA2 és 15/?-PGA 2 vegyületek mintáiból egy-egy foltot viszünk fel. A lemezt az A—IX oldószer-rendszerrel futtatjuk. A kapott foltokat azután vanillin-foszforsav-permettel hívjuk elő; vö. McAleer, Arch. Biochem. E. Biophys. 66, 120 (1957). Az ismeretlen (azonosítandó) anyaggal kapott foltot a két vonatkoztatási minta foltjával vetjük egybe és ennek alapján állapítjuk meg, hogy a korall-minta melyik típushoz tartozott: az S-alak a PGA^ foltjának, az R-alak pedig a 15/?-PGA2 foltjának megfelelő foltot ad. 2. előállítási előírás PGA2 kinyerése a Plexaura homomalla (Esper) 1792 S-alakból. A Jamaica északi partja körüli zátonyokból begyűjtött Plexaura homomalla (Esper) 1792 S-alak telepeit szilárd széndioxid segítségével megfagyasztjuk; ennek a fagyasztásnak a telepek kiemelése után 1 órán belül kell megtörténnie. A megfagyasztott telepeket azután szilárd széndioxidot tartalmazó hőszigetelt dobozokban, kb. —20 °C alatti hőmérsékleten tároljuk felhasználásukig. 700 g fenti módon megfagyasztott kolóniát kis szemcsenagyságúra őriünk és 1500 ml vizet keverünk hozzá. Ezt a keveréket kb. 20 óra hosszat 25 °C hőmérsékleten keverjük, majd diatomaföld-rétegen keresztül leszűrjük, és a szűrletet tömény sósavval kb. 2—3 pH-értékre savanyítjuk. Az így megsavanyított szűrletet etilacetáttal négyszer extraháljuk, az etilacetátos kivonatokat egyesítjük, leszűrjük, sóoldattal mossuk, majd vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. 11 g olajszerű maradékot kapunk. A fentebb említett diatomaföld-rétegen történő szűrés során a szűrőrétegen maradt szilárd anyagot metanolban (a szilárd anyag befedésére elegendő mennyiségű metanolt alkalmazunk) 2 óra hosszat keverjük, majd leszűrjük és ezt a szűrletet is bepároljuk; 14 g olajszerű maradékot kapunk. A fenti két olajszerű maradékot egyesítjük és 1500 g, savval mosott szilikagélen kromatografáljuk; először 8 liter oly technikai n-hexánnal (Skellysolve B) eluálunk, amely növekvő mennyiségi arányban 25—65% etilacetátot tartalmaz, majd ugyancsak 8 liter, 65—100% etilacetátot (növekvő mennyiségi aranyban) tartalmazó ugyanilyen oldószerrel, végül pedig 5 liter 2% metanolt tartalmazó etilacetáttal eluálunk; 500 ml-es frakciókat fogunk fel. A 8—12. frakciót egyesítjük és bepároljuk; kis mennyiségű PGA2 vegyületet kapunk ezekből a frakciókból, amely nyomnyi mennyiségben PGA2 -metilésztert is tartalmaz. A 15—18. frakciót szintén egyesítjük; bepárlás útján 9,54 g PGA2 vegyületet kapunk. Végül a 35—40. frakciót egyesítjük és bepároljuk; ebből 0,414 g PGE2 vegyületet kapunk. 3. előállítási előírás 15/?-PGA2 kinyerése Plexaura homomalla (Esper) 1792 R-alakból. 5 Florida Miamihoz közeli délkeleti partjainál levő zátonyokból gyűjtött Plexaura homomalla (Esper) 1792 R-alak kolóniáit 10 cm körüli nagyságú darabokra aprítjuk, majd szilárd széndioxiddal megfagyasztjuk a felaprított kolóniákat. A fagyasztásnak a kolóniák 10 kiemelése után 1 órán belül kell megtörténnie. A megfagyasztott anyagot szilárd széndioxidot tartalmazó hőszigetelt dobozokban tartjuk, kb. — 20 °C alatti hőmérsékleten, egészen addig, amíg fel nem használjuk őket. 15 A fenti módon kezelt 600 g felaprított kolóniát 1500 ml vízzel keverjük össze, majd ezt a keveréket 25 °C hőmérsékleten 23 óra hosszat keverjük. Ezután a zagyot diatomaföld-rétegen keresztül leszűrjük és a szűrletet tömény sósavval kb. 2—3 pH-értékre sava-20 nyitjuk. Az így megsavanyított szűrletet etilacetáttal négyszer extraháljuk. Az etilacetátos kivonatokat egyesítjük, sóoldattal mossuk, vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk és bepároljuk. 9,2 g olajszerű maradékot kapunk. 25 A diatomaföld-rétegen levő szilárd maradékot e maradék elfedéséhez elegendő mennyiségű metanollal 15 óra hosszat keverjük 25 °C hőmérsékleten. Ezután leszűrjük az elegyet és a szűrletet bepároljuk. A bepárlási maradékot etilacetátban oldjuk és az oldatot előbb 30 3 n sósavoldattal, majd telített sóoldattal mossuk, vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk és bepároljuk. Ily módon 5,83 g olajszerű maradékot kapunk. Ezt a második olajszerű maradékot egyesítjük az előzőek során kapott olajszerű maradék 8,2 g-jával, majd 35 1 kg, savval mosott szilikagélen kromatografáljuk; az eluálást hexánnal (Skellysolve B) végezzük, 3 literes adagokban, amelyek növekvő, 25%, 35%, 45%, 55% és 65% mennyiségi arányú etilacetátot tartalmaznak. Az eluátumot 500 ml-es frakciókban fogjuk fel. A18—22. 40 frakciót egyesítjük és bepároljuk, ebből 5,54 g 15/?-PGA2 vegyületet kapunk. A 15—17. frakciót is egyesítjük és bepároljuk; ebből 1,37 g 15/?-PGA2 -metilésztert kapunk. 45 4. előállítási előírás PGA2 vegyületek kinyerése Plexaura homomalla (Esper) 1792 S-alakból. A Plexaura homomalla (Esper) 1792 S-alak fenti 50 módon (vö. 2. előállítási előírás) elkészített fagyasztott kolóniáit kézi erővel néhány cm hosszúságú darabokra tördeljük. 500 g ilyen darabokra tördelt kolóniát az anyag elfedéséhez elegendő mennyiségű metanollal öntünk le és 25 °C hőmérsékleten 3 óra hosszat állni 55 hagyjuk. Ezután az egészet megőröljük (pl. Waring őrlő-keverő készülékben), leszűrjük és a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A bepárlási maradékot etilacetátban oldjuk, az oldatot n sósavoldattal, majd sóoldattal mossuk, vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk 60 és csökkentett nyomáson bepároljuk. A kapott olajszerű maradékot 2 kg savval mosott szilikagélen kromatografáljuk. A szilikagélt hexánnal (Skellysolve B) megnedvesített állapotban töltjük az oszlopba; 24 liter eluáló-folyadékot alkalmazunk, amely 25%-tól 100%-ig 65 növekvő mennyiségű etilacetátot tartalmazó hexánból 9
