163454. lajstromszámú szabadalom • Eljárás prosztaglandin-E2- előállítására
7 163454 8 Az említett Plexaura homomalla említett alakjainak télepei bőségesen fordulnak elő az Atlanti Óceán nyugati részének tropikus és szubtropikus zónáiban, kb. 45 méterre az árapály-szinttől fekvő óceán-zátonyokon, Bermudától kezdve egészen a brazíliai zátonyokig, beleértve a Florida keleti partjainál, a Karibi szigeteknél, a szárazföld közelében, valamint a Mexikói Öbölben a szárazföld és a szigetek környezetében levő zátonyokat. Ezek a telepek bokrokhoz vagy kis fákhoz hasonlító megjelenésűek és könnyen azonosíthatók a szakmában járatosak által Plexaura homomalla (Esper) 1792 telepekként. Az R- és S-alakok megkülönböztetése az alább ismertetendő módszerekkel történhet. A Plexaura homomalla e két alakjának telepei könynyen szétválaszthatok egy külső kortikális részre és egy belső, huzalszerű, fehérjetartalmú vázra. Ezekben a telepekben szimbiózisban élő algák és Zooxanthellafajok is jelen vannak. A Plexaura homomalla említett telepei a (IX) általános képletű vegyületeken kívül további analóg származékokat is tartalmaznak; mindezek a vegyületek a (Vila), (VIII) és a már említett (IX) általános képlettel jellemezhetők; e természetes előfordulású vegyületek képletében R2 és R 3 a fenti jelentésűek lehetnek, R3 emellett még acetilcsoportot is képviselhet. Weinheimer és mtsai (Tetrahedron Letters, 59. sz. 5185, 1969) említik már az R2 és R 3 helyén egyaránt hidrogénatomot, vagy pedig R2 helyén metilcsoportot és R3 helyén acetilcsoportot tartalmazó (VIII) általános képletű vegyületek jelenlétét a Plexaura homomalla (Esper) levegőn megszárított kérgében. A Plexaura homomalla (Esper) 1792 (S-alak) főként a 15-acetoxi-PGA2 -metilésztert tartalmazza. Viszonylag kisebb mennyiségben van jelen a hidroxi-metilészter, az acetát és a hidroxi-sav, valamint a (Vila) általános képletnek megfelelő, de 15(S) konfigurációjú PGE2 vegyületek. Ha a (Vila), (VIII) vagy (IX) általános képletnek megfelelő 15-acetoxi-metilészter vegyületeket, vagyis az R2 helyén metilcsoportot, R3 helyén pedig acetilcsoportot tartalmazó származékokat kívánjuk kinyerni, akkor a megfagyasztott Plexaura homomalla telepeket megdaráljuk és valamely szokásos, előnyösen mérsékelt vagy nagy polaritású szerves oldószerrel, célszerűen diklórmetánnal vagy metanollal extraháljuk: ezt az extrakciót előnyösen 15—30 percig folytatjuk egy nagy fordulatszámú keverő-extraktorban. A kívánt vegyületeket azután a kapott kivonatból bepárlás útján nyerjük ki nyers állapotban, és a bepárlási maradékot kromatografálással tisztítjuk. Ilymódon 1500 g megfagyasztott Plexaura homomalla (Esper) 1792 (R-alak) telepből kb. 24 g 15-acetoxi-15/3-PGA2 -metilésztert és kb. 1—1 g 15/3-PGA2 -metilésztert és 15/?-PGE 2 -t nyerhetünk ki, ha az extrakciót diklórmetánnal végezzük. Hasonlóan viszonylag nagy mennyiségekben nyerjük ki a 15-acetoxi-PGA2 -metilésztert a Plexaura homomalla (Esper) 1792 (S-alak) fagyasztott kultúráinak diklórmetános extrakciója útján. Ha a (Vila), (VIII) vagy (IX) általános képletnek megfelelő 15-hidroxi-metilésztereket, vagyis az R2 helyén metilcsoportot, R3 helyén pedig hidrogénatomot tartalmazó vegyületeket akarjuk kinyerni, akkor célszerűen olymódon járunk el, hogy a Plexaura homomalla telepeit egészben vagy felaprított állapotban megfagyasztva, megdaráljuk és azután Valamely rövidszénláncú alkanollal, előnyösen metanollal vagy etanollal érintkeztetjük néhány napig, 25 °C hőmérsékleten. Az így kapott kivonatból azután az oldószert elpárologtatjuk és a bepárlási maradékot kromatografáljuk. Ily módon 5 a hidroxi-metilésztert viszonylag jóval nagyobb mennyiségben kapjuk, mint a 15-acetoxi-metilésztert. Ha a Plexaura homomalla telepének részecskéit lényegesen rövidebb ideig érintkeztetjük az alkanollal, akkor ugyanolyan mennyiségben és egymásközötti arányokban 10 kapjuk a különböző (Vila), (VIII), illetőleg (IX) általános képletű vegyületet, mint ha diklórmetánt alkalmaznánk extrahálószerként. Az alábbiakban egy másik módszert is ismertetni fogunk az említett 15-hidroxi-metilészterek kinyerésére. 15 A 15/S-PGA2 , 15/?-PGE 2 és PGA 2 vegyületeket, tehát az R2 és R 3 helyén egyaránt hidrogénatomot tartalmazó (Vila), (VIII), illetőleg (IX) általános képletű származékot a fenti módon Plexaura homomalla telepekből extrakció útján kinyert megfelelő metilészterekből illető-20 leg 15-acetoxi-metilészterekből állíthatjuk elő. Az acetilcsoportnak a (Vila), (VIII) illetőleg (IX) általános képletű 15-acetoxi-metilészterekből való eltávolítása pl. oly módon történhet, hogy az 15-acetoxi-metilésztert valamely rövidszénláncú alkanolban, előnyösen meta-25 nolban oldjuk és az oldatot erős savval, pl. perklórsavval kezeljük kb. 15 óra hosszat 25 °C hőmérsékleten. A (Vila), (VIII), illetőleg (IX) általános képletű metilészterekből a metilcsoportot célszerűen enzimes hidrolízis útján távolítjuk el, az 1 937 912 sz. Német Szövet -30 ségi Köztársaság-beli közzétételi iratban (másolatban közli a Farmdoc Complete Specifications, 14. köt. 6869R sz., 1970. március 18.) ismertetett eljárással. A 15/3-PGA2 , 15/S-PGE 2 vagy PGA 2 vegyületek a Plexaura homomalla egészben vagy felaprított álla-35 pótban megfagyasztott telepeiből oly módon is kinyerhetők, hogy a kb. —20 °C hőmérsékleten egészben vagy felaprított állapotban megfagyasztott Plexaura homomalla telepeket felengedni hagyjuk és 20—30 °C hőmérsékletre melegítjük, majd legalább 24 óra hosszat 40 ezen a hőmérsékleten tartjuk. Ilyen kezelés után a (Vila), (VIII) és (IX) általános képletű vegyületek közül az R2 helyén metilcsoportot és R3 helyén acetilcsoportot tartalmazó származékok gyakorlatilag már egyáltalán nincsenek jelen a termékben; fő alkotórészként oly 45 (Vila), (VIII) és (IX) képletű vegyületek vannak jelen, amelyek mind R2, mind R 3 helyén hidrogénatomot tartalmaznak, míg kisebb mennyiségben oly analóg vegyületek, amelyek R2 helyén metilcsoportot és R 3 helyén hidrogénatomot, vagy pedig R2 helyén hidrogénatomot 50 és R3 helyén acetilcsoportot tartalmaznak. Amint az előbbi esetben, az ilyen (Vila) és (VIII) képletű vegyületeket a Plexaura homomalla (Esper) 1792, R-alak telepiből, a (IX) általános képletnek megfelelő vegyületeket pedig a Plexaura homomalla (Esper) 1792, S-alak tele-55 peiből nyerjük ki. A PGA2 és PGE 2 típusú szabad savak kinyerésének előnyös módszere értelmében oly módon járunk el, hogy a Plexaura homomalla telepeit megdaráljuk, előnyösen 60 legfeljebb kb. 5 mm szemcsenagyságú részekre, majd a megdarált elegyet vízzel tartjuk érintkezésben 20—30 °C hőmérsékleten, legalább 24 óra hosszat. Az elegyet azután leszűrjük és a szűrletet valamely erre alkalmas, vízzel nem elegyedő oldószerrel, pl. etilacetáttal extra-65 háljuk. A szilárd maradékot is extraháljuk valamely 4
