163453. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-amino-3-metil-delta3-cefem-4-karbonsav előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1972. III. 16. (TO—867) Japán elsőbbsége: 1971. V. 31. (38143/71) Közzététel napja: 1973. III. 28. Megjelent: 1975. IV. 30. 163453 Nemzetközi osztályozás: C 07 d 99/24 C 12 d 13/10 C 07 b 29/02 *^^- "HliFíiTríT""'TM Feltalálók: Abe Jinnosuke vegyész, Shizuoka, Watanabe Tetsuo vegyész, Kanagawa, Yamaguchi Tsutomu vegyész, Shizuoka, Matsumoto Kunio vegyész, Shizuoka, Fujii Tadashiro vegyész, Shizuoka, Japán Tulajdonos: TOYO JOZO COMPANY LTD. cég, Shizuoka, Japán Eljárás 7 amino-3-metil A -eefem-4-karbonsav előállítására í A találmány tárgya eljárás 7-amino-3-metil-A3

-cefem-4-karbonsav (a továbbiakban: 7-ADCA) előállítására 7-fenilacetamido-3-metil-A3

-cefem-4-karbonsav enzimes dezacilezése útján. A találmány szerinti eljárással a 7-ADCA-t, azaz a 7-amino-3-metilTA3

-cefem-4-kar- 5 bonsavat Bacillus megaterium-ból származó enzimkészítmény felhasználásával állítjuk elő. A 7-ADCA-t eddig a következő eljárásokkal állították elő: a cefalosporin C-t palládium/csontszén jelenlétében katalitikusan redukálták, majd a kapott 7-(co- 10 -aminoadipoilamid)-3-metil-A3

-cefem-4-karbonsavathidrolitikus úton dezacilezték (3 124 576 sz. USA-beli szabadalmi leírás); 7-amino-cefalosporánsavat katalitikus redukcióval dezacilezték (3 124 576 sz. USA-beli szabadalmi leírás); fenoximetil-penicillinből 7-fenoxi- 15 -acetamid-3-metil-A3

-cefem-4-karboxilátot állítottak elő, a kapott vegyületet piridin jelenlétében, vízmentes szerves oldószerben foszforpentakloriddal reagáltatták, a kapott imidkloridot alkoholos reakcióval a megfelelő imidészterré alakították, majd a kapott terméket hidrolízisnek vetették alá (717 741 és 737 761 sz. belga szabadalmi leírások). A fent ismertetett eljárások mindegyike kémiai módszer. A 7-ADCA előállítására enzimes eljárásmódot eddig még nem javasoltak. 25 Kísérleteink során a 7-ADCA enzimes előállítására különféle, a 7-fenoxi-acetamido-3-metil-A3

-cefem-4-karbonsav vagy 7-fenilacetamido-3-metil-A3

-cefem-4-karbonsav dezacilezésére alkalmas mikroorganizmus-törzseket vizsgáltunk. Azt tapasztaltuk, hogy a talajból 30 elkülönített, a Bacillus nemzetséghez tartozó, B—400 jelű törzs (deponálási szám: BIKOKEN 503) a 7-fenoxi-acetamido-3-metil-A3-cefem-4-karbonsav és a 7-fenilacetamido-3-metil-A3

-cefem-4-karbonsav amid-kötésének hasítására alkalmas enzimet termel. Azt tapasztaltuk továbbá, hogy ha 7-fenilacetamido-3-metil-A3

-cefem-4-karbonsavat kezelünk a fenti törzsből származó enzimkészítménnyel, önmagában inaktív, azonban fenilacetilklorid felhasználásával kvantitatív hozammái 7-ADCA-vá alakítható terméket kapunk. Vizsgálataink szerint a fenti törzsből származó enzimkészítmény felhasználásával 7-fenoxiacetamido-3-metil-A2

-cefem-4--karbonsavból7-amino-3-metil-A2

-cefem-4-kárbönsavat állíthatunk elő. A következőkben a B—400 jelű törzs mikrobiológiai sajátságait ismertetjük. I. Morfológiai jellemzők (a mikroorganizmust 18—24 20 órán át 30 °C-on húsleves-agar ferde tenyészeten tenyésztjük): (1) Rúdalakú, főként hosszú láncokból álló, gömbölyű végű sejtek (2) A sejtek mérete 1,2— l,5[i,X 2,0—3,5JJL (3) Sejthártya nem észlelhető (4) Mozgékony, ostoros sejtek (5) Gram-pozitív (6) Spórák jellemzői szójabab-agáron 5 napon át 30 °C-on végzett tenyésztés után: 163453 1