163385. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 5-amino- 1béta-D-ribozil-4-imidazol-karboxamidok ciklofoszforsav-származékainak előállítására
5 163385 6 A találmány szerinti vegyületek említett antilipolitikus hatásuknál fogva alkalmasak gyógyszerként való felhasználásra olyan esetekben, amelyekben az eddig ismert antilipolitikumok hatástalanok. A találmányt az alábbi példákkal világítjuk meg közelebbről az oltalmi kör korlátozása nélkül. 1. példa AICAR-3',5'-MP, szabad sav (R=H) a) 1,625 g (4,8 mmól) AICAR-5'-foszforsavat és 1,4 g (4,8 mmól) morfolino-N,N-diciklohexil-karboxamidiniumsót 15 ml piridinben és 2 ml vízben oldunk. Az oldatot bepároljuk, majd 15 ml piridint adunk hozzá és szárazra pároljuk, az utóbbi műveletet még kétszer megismételjük, és a maradékot 500 ml vízmentes piridinben oldjuk. b) Egy 2 literes lombikba betoltunk 500 ml piridint, hozzáadunk 2 g (9,6 mmól) diciklohexilkarbodiimidet, és a keveréket forrásig melegítjük. A keverékhez 3,5 óra alatt hozzácsepegtetjük az a) bekezdés szerint előállított oldatot. Az adagolás után a tiszta reakcióelegyet további 3 óra hosszat melegítjük visszafolyató hűtő alatt. Ezután a piridint majdnem teljesen ledesztilláljuk, a maradékhoz 50 ml vizet adunk, a kivált diciklohexilkarbamidot leszívatjuk és a szűrőn háromszor mossuk vízzel. Ismételt bepárlás, szűrés és éteres extrakció után a vizes fázist formiát fázisú Dowex 1X2 ioncserélő gyantára visszük és hígított hangyasavval eluáljuk. A savas eluátumot bepároljuk, amikoris kristályos alakban kiválik az AICAR-3',5'-MP. A kristályos anyagot kicentrifugáljuk, kétszer 1 ml jéghideg vízzel, majd egyszer alkohollal mossuk, azután foszforpentoxidon vákuumban szárítjuk. 275 mg (18%) AICAR-3',5'-MP-t kapunk gyengén rózsaszín kristályok alakjában. A termék barnára színeződés után 239 °C-on olvad bomlás közben. Elemi összetétele: a C9 H 12 0 7 N 4 P (M = 319,2) képletre számított: C =33,9%; H=3,8%; N = 17,5%; P=9,7%; talált: C=33,7%; H=4,0%; N = 17,2%; P=9,4%. 2. példa AlCAR-3' ,5'-MP előállítása inozin-3',5'-MP-ből hasítással a) 2'-0-Acetil-inozin-3',5'-MP előállítása 10 g inozin-3',5'-MP-t szabad sav alakjában 300 ml piridinben, 8,5 g trietilaminban és 18,7 g ecetsavanhidridben oldunk, azután 3 órán át rázzuk szobahőmérsékleten. A sárga oldatot betöményítjük, és a kapott olajos maradékot mintegy 200 g jéggel összekeverjük, majd szárazra bepároljuk. Ezt a műveletet még kétszer megismételjük 100—100 g jéggel. A kapott maradékot kb. 300 ml vízben oldjuk, éterrel extraháljuk, azbesztből készült szűrősegédanyaggal derítjük, majd liofilizáljuk. A kapott anyagot foszforpentoxidon vákuumban megszárítjuk. 14,4 g (100%) inozin-3',5'-MP-2'-0-acetil-trietil-ammóniumsót kapunk. b) 2'-0-Acetil-inozin-3',5'-MP reakciója NaOH-val és klórdimetiléterrel 14,4 g (30,5 mmól) 2'-0-acetil-inozin-3',5'-MP-t (M=471) 300 ml dimetilformamidban oldunk, 1,6 g 5 NaH-t (50%-os olajos diszperzió, 30,5 mmól+ 10% fölösleg) adunk hozzá, és 3 órán át keverjük szobahőmérsékleten. Ezután a dimetilformamidos fázist 49 g monoklórdimetiléterrel keverjük össze és 15 órán át keverjük szobahőmérsékleten. A kromatogram 10 (Leloir keverék — 1 mólos ammóniumacetát oldat és 97%-os etanol 2 : 5 arányú elegye —, pH 7) szerint az átalakulás N^metoximetil-inozin-S'.S'-MP-tá teljesen végbemegy. A reakcióelegyet ezután olajszivattyúval létesített vákuumban 50 °C-os fürdőn szárazra pároljuk. 15 Az olajos maradékot összekeverjük 200 ml 2 n KOH-val, azután az oldatot 30 percig melegítjük visszafolyató hűtő alatt, mire a gyűrű felhasadása közben a metoximetil-csoport és a 2-helyzetű szénatom eliminálódik. A forró lúgos oldatot azonnal összekeverjük mintegy 20 200 ml vízzel, lehűtjük és H+ -fázisú Dowex-50 ioncserélővel pH-ját 3 és 4 közé állítjuk. Az ioncserélőt leszívatjuk, vízzel addig mossuk, míg a kapott frakció extinkciómentes, az egyesített szűrleteket pedig erősen betöményítjük. 25 A kapott tömény oldatot ezután 4 és 5 közötti pH értéken szénoszlopon sómentesítjük és 10: 10: 0,06 arányú etanol-víz-ammónia eleggyel eluáljuk. A szénről leoldott tömény eluátumot azután 250 ml térfogatú 50—100 mesh szemcseméretű, formiátfázisú Dowex 30 1X2 gyantán kromatografáljuk. A szennyezéseket 0,05, illetve 0,1 n hangyasavval kimossuk. Az AICAR-3',5'-MP-t azután 0,5 n hangyasawal eluáljuk az oszlopról. Az eluátumot 30—50 ml térfogatra betöményítjük, majd összekeverjük kb. 20 ml alkohollal, és egy éjszakán át 35 4 °C hőmérsékleten hűtőszekrényben kristályosítjuk. A kapott kristályokat leszívatjuk és olaj szivattyúval létesített vákuumban szobahőmérsékleten megszárítjuk. 5 g (54%) AICAR-3',5'-MP-t kapunk szabad sav alakjában. A termék azonos az 1. példa szerinti módon 40 előállított termékkel. 3. példa Karboxietil-AICAR-3',5'-MP (n=2; A=~COR'; 45 R'=—OH) 500 mg (1,4 mmól) inozin-3',5'-MP szabad savat hígított káliumhidroxiddal semlegesítünk és 15 ml 2 n K2 C0 3 és 15 ml dioxán elegyében keverés közben 1,5 ml 50 propiolaktont adunk hozzá, és a reakcióelegyet 6 órán át keverjük szobahőmérsékleten. A reakcióelegy pH-ját ezután perklórsawal 3-ra állítjuk be, a kicsapódó káliumperklorátot kiszűrjük és 95 %-os etanollal mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékot bepároljuk, a maradé-55 kot 15 ml vízzel feloldjuk, az oldat pH-ját 1 n KOH-val 7-re állítjuk be, és hozzáadunk ugyanolyan mennyiségű 1 n káliumhidroxidot. Ezután az oldatot 30 percig 100 °C-on melegítjük, és hidrogénfázisú Dowex-50 ioncserélővel pH-ját 7-re állítjuk be. A reakció rendsze-60 rint majdnem teljesen végbemegy. Tisztítás végett az oldatot egy acetát fázisú DEAE-Sephadex-szel töltött 25 X 2 cm méretű oszlopra visszük, és egyenletesen változó keverékösszetétellel 1 liter vízzel és 1 liter 0,5 ni ammóniumacetáttal pH 6-nál eluáljuk. Néhány kisebb 65 előcsúcs után következik a főcsúcs, amely az UV-abszor-3
